间接荧光免疫检测ANA与ENA应用效果.docVIP

间接荧光免疫检测ANA和ENA的应用效果 　　摘要：目的：探讨间接荧光免疫检测ANA和ENA的应用效果。方法：选择2009年12月至2012年7月我院确诊的类风湿性关节炎（RA）患者60例与正常体检人80例作为对照组， 都选择间接荧光免疫检测ANA和ENA。结果：经过观察，间接荧光免疫检测ANA的阳性率为100.0%，检测ENA的阳性率为96.7%。而对照组的ANA和ENA阳性率分别为3.3%%和6.7%。结论：类风湿性关节炎是一种免疫调节异常为特征的自身免疫性疾病，间接荧光免疫检测ANA和ENA的应用为早期诊断与早期治疗提供了很好的参考。 关键词：间接荧光免疫；ANA；ENA；类风湿性关节炎 【中图分类号】R593.22【文献标识码】A【文章编号】1674-7526（2012）06-0363-01?? 类风湿性关节炎（RA）是一种发病率较高的慢性、系统性自身免疫性疾病，可累及身体的大多数组织和器官，我国发病率约为50/10万，高出世界平均发病率一倍多[1]。近年来国内外资料显示类风湿性关节炎的发病率正在急剧增加[2-3]。ANA和ENA是一组针对自身真核细胞的各种细胞核成分的自身抗体的总称，这些自身抗体的存在对某些自身免疫性疾病具有重要的提示作用。在常规检测中，IFA法检测ANA和ENA耗时较长、需专门设备及经验较丰富的技术人员读取结果[4]。近年来随着现代分子生物学技术与蛋白质合成技术的迅速发展，纯化抗原技术和ELISA技术也得到相应发展，间接荧光免疫ELISA法操作更为简单且易实现自动化。本文为此具体探讨了间接荧光免疫检测ANA和ENA的应用效果，现报告如下。?? 1资料与方法 1.1实验对象：选择2009年12月至2012年7月我院确诊的类风湿性关节炎（RA）患者60例（美国风湿病协会1982年修订的诊断标准），男18例，女42例，年龄15-76岁，平均年龄为42.87±2.51岁。同期选择正常体检人80例作为对照组。 1.2诊断方法：都选择间接荧光免疫检测ANA和ENA，ANA的检测：将患者血清用磷酸盐缓冲液进行1∶10稀释，加到Hep-2细胞服肝细胞抗原基质复合片上，37℃温育30分钟，用磷酸盐缓冲液洗涤复合片3次，每次5分钟。将荧光2抗加到基质片上，37℃温育30分钟，用磷酸盐缓冲液洗涤3次，将抗原基质片用缓冲甘油封片，在荧光显微镜下观察。如果实验基质没有明显的荧光染色，或没有可以辨认的荧光模式，则为ANA阴性。反之则为阳性，须进一步将血清进行1∶40，1∶160，1∶320倍稀释后进行检测，以确定抗体的最后滴度。根据荧光模式的不同，可初步提供自身抗体针对靶抗原的特异性，为进一步检测提供信息。 抗ENA抗体的检测：将患者血清用标本稀释液做1∶10稀释后，滴加到反应板上，盖上抗原载片，与摇床上室温孵育30分钟，用缓冲液浸洗15分钟，用干净的吸水纸将载片上的水轻轻擦掉。将碱性磷酸酶标记的抗人IgG抗体滴加到反应板上，与摇床上室温孵育30分钟，用缓冲液浸洗巧分钟，加底物溶液到反应板上，盖上抗原载片，于摇床上孵育巧分钟。最后用蒸馏水冲洗抗原载片并吹干，相应的抗原线呈现清晰可见的蓝色为阳性，无色为阴性。 1.3统计学处理：使用SPSS19.0统计软件，两种方法检测的阳性率采用X??2检验，检验水准为双侧a=0.05。?? 2结果 经过观察，间接荧光免疫检测ANA的阳性率为100.0%（60/60），检测ENA的阳性率为96.7%（58/60）。而对照组的ANA和ENA阳性率分别为3.3%（2/60）和6.7%（6/60）。具体见表1。?? 3讨论 类风湿性关节炎的发病原因比较复杂，一般认为是由多因素引起的，通过遗传物质，性激素和环境因素相互作用引起机体免疫调节功能紊乱，产生大量自身抗体。这些因素共同作用导致类风湿性关节炎的发生。类风湿性关节炎目前尚不能治愈，但是近年来，由于自身抗体检测方法的广泛应用，能够做到早诊断、早治疗，使得类风湿性关节炎的生存率有了很大改善[5]。抗dsDNA抗体和抗Sm抗体作为类风湿性关节炎诊断的血清学指标，虽然特异性较高，但敏感性较低，不利于早期诊断。而间接荧光免疫使用包被稀有抗原及增加其它相应抗原包被量后，使ELISA法检测结果更准确，更全面，可缩短报告时间，节约成本，也不会丢失荧光模型信息，从而提高整体工作效率[6]。