根癌农杆菌介导真菌遗传转化研究进展.pdf

中国生物工程杂志 oFcHINEsEBIoTEcHNoLoGY 第22卷第5期 JouRNAL 2002年10月 根癌农杆菌介导真菌遗传转化的研究进展” (西南农业大学生物技术中心重庆400716)u、IS △ 翟篓黧技磐重耋=∞3A 摘要根癌农杆茼介导的真茵遗传转化是近年来发展的一种新方法，与其它方法相比，该方 法具有操作简便、转化效率高和易得到稳定转化子等特点。目前，在根癌农杆茵介导下已实 现了多个属种真茼的遗传转化，显示出良好的应用前景。综述了根癌农杆茵介导真菌遗传 转化的转化机理和rr．刚A在真菌细胞中的存在方式等方面的研宄结果，并展望这一方法的 应用前景。 关键词 根癌农杆茵 真菌 遗传转化 真菌在自然界具有重要的地位，它是不同生 遗传转化。 态环境中的最初分解者之一，同时真菌在工业、 根癌农杆菌是一种革兰氏阴性土壤杆菌，它 农业、食品行业和医药等领域应用十分广泛。如 能够在植物的受伤部位侵染植物细胞，将T．DNA 转入植物细胞并整合进植物的基因组，最终导致 构巢曲霉(^{胛，州fw鲫弛mo^)由于具有很强的 生产同源、异源蛋白的能力、GRAs(胛聊mZ肿瘤的发生。在大肠杆菌与酵母菌能够通过接 合的方式将前者的质粒转移到后者”’和农杆菌 recog“洫d∞s啦竹)和成熟的发酵工艺等特点而 广泛应用于食品和食品加工行业。杀虫真菌白 转化植物等现象的启发下．Bundock等人尝试用 僵菌和绿僵菌广泛应用于农业和卫生害虫防治。 根癌农杆菌介导酵母菌遗传转化，并取得了成 但是，从自然界直接分离的菌株和通过常规育种 功”。。进一步研究发现根癌农杆菌介导的真菌 得到的菌株在多种性状上并不能满足人们的需 遗传转化法具有效率高，成本低，操作方便和重 要，至于通过常规方法用真菌生产异源蛋白更是 复性好等特点”。1。 难以实现。真菌遗传转化技术的出现为解决这 1根癌农杆菌介导的遗传转化的真菌种 些问题提供了有效的途径。 类 自从1973年Mishm等首次报道真菌遗传转 化以来”‘21，真菌特别是酵母菌的遗传转化取得 了很大的进展。但目前广泛采用的真菌转化方 杆菌介导酵母菌的遗传转化以来，到目前为止已 法主要有PEG．cack法、电激法和基因枪法，这在10多种真菌上取得成功。已转化成功的真菌 些方法大都以原生质体为受体。除了制备原生 见表1。 质体过程复杂、重复性差外，这些方法最大的问 2根癌农杆菌介导真菌遗传转化的机理 题在于转化子不稳定，转化效率低”1。其中转化 效率低已成为制约真菌遗传转化的瓶颈问题一-。 为了方便说明根癌农杆菌介导真菌遗传转 针对这一问题．许多学者提出了一些改进方法和 化的机理，有必要将其介导植物遗传转化的机理 新方法，其中最有效的是根癌农杆菌介导的真菌 作一介绍。根癌农杆菌将T—DNA转移进植物细 胞主要是依赖于Ti质粒上一系列vir基因的表 *国家高技术研究发展计划(拍3)资助项