毛细管电泳单细胞分析方法和应用进展1.pdf

维普资讯 fjJIl!分析 毛细管电泳单细胞分析方法及应用进展1 翁前锋 许国旺 中国科学院大连化学物理研究所国家色谱研究分析中心，大连 116011 摘 要 本文对毛细管电泳用于单个细胞分析的方法及应用进行综述。较系统地论述 了毛细管电泳分析时单个 细胞取样、溶膜、衍生和检测的方法，以及应用新进展。 关键词 单细胞分析 毛细管电泳 应用 1 前言 调节，1-100nL体积的试样可以导入或导出。移液器尖端可直 细胞是生物体结构和生命活动的基本单元。在单个细胞水 接插入分离毛细管的管 口。单个神经细胞经分离后置于200nL 平上进行研究，可以获得反映细胞生理状态和过程的更准确、 的微型管状瓶中，均化，再离心，将上层清液转移到另一微型 更全面的信息，还可以使人们能更好地了解细胞群体中某些特 管状瓶中，加入试剂衍生化后用微进样器移取部分溶液加入分 殊的细胞功能，更深入地认识细胞个体差异 、细胞间相互作用 离毛细管内，再分离检测。此法优点是溶解细胞时反应完全， 和信息传递以及神经递质、药物或毒物刺激的生理影响等更深 内标或衍生试剂与试样混合均匀，衍生反应完全，测定误差较 层次的信息。因此，单细胞分析技术的研究与发展具有重要意 小。缺点是样品稀释后，不能全部进样，使方法检出限变差， 义，已成为分析科学中的一个新兴的前沿领域。 只适用于体积较大的无脊椎动物神经细胞。应用范围有限。 对单细胞的分析技术主要包括伏安微电极法l】1，荧光图象 2．2 单个全细胞进样 技术12】，微型凝胶电泳 1，微型薄层色谱法4【1，微型玻管电极 在毛细管电泳的单个细胞分析中，大多采用单个全细胞进 法5[1，光电显微技术6[J，开管液相色谱和毛细管电泳 (CE)微柱 样。分离毛细管的进样端被用作微进样器。分离的单个细胞， 分离方法。开管液相色谱和CE因仅需少量样品并具有高分离 用电迁移[151或流体动力学[16-18压入或吸入)，将整个细胞进样 度等优点，特别适用于多种组分测定和定量 ，并已成功地用于 到分离毛细管内，在毛细管内溶解细胞膜，再用高压电泳分离 单细胞多组分的定量检测。其中，CE技术 自身具有许多内在的 及检测。由于将单个细胞全部进样保证了细胞组分的100％进 特点：(1)非常小的进样体积 哺乳动物细胞大小直径典型的 样，使细胞内低含量组分获得最佳检出限。易氧化组分不会氧 约 10—30XIm，体积约0．5—14pL(按球形估算)。对于标准规格 化，操作方便。Olefirowicz1【5】等用25 m内径毛细管，采用电 的液相色谱 (LC)，对单细胞进样操作将导致至少106倍的稀释 迁移方式将75 m的神经细胞移入管内。金文睿等[19·01不需对 因子。这种浓度稀释任何灵敏的检测器也弥补不了。(2)高分 毛细管进样端作任何腐蚀，也不需要微操纵器，在有一定细胞 离效率这对于细胞内组分复杂、种类众多的单细胞分析是非常 数 目条件下，利用细胞在溶液中漂浮移动，当细胞靠近管口时， 重要的。(3)高分离速度 快速分离意味着高通量、高效率。4) 电迁移引入细胞，费时一般不超过2分钟。Sims等2【】】设计的细 生物适应性环境 CE中常用的以水溶液为主的缓冲体系对生物 胞取样方法与上述均不相同，他们设计的细胞进样装置需脉冲 细胞及生物分子非常友好。因此毛细管电泳很适合分析单细胞， 激光辅助，脉冲激光通过显微镜的物镜聚焦在单细胞所在的缓 并将在单细胞的分析中发挥出越来越重要的作用。 冲液与载波片的界面处。光束聚焦点不直接在单细胞上而是距 单细胞的毛细管电泳分析已有几篇综述报道l7-】。本文对毛