染色体C一分带与原位杂交技术在遗传学上的应用.pdfVIP

一 I、f7 1998年 2期 生物技术通报 染色体 C一分带和原位 杂交技术在遗传学上的应用 田 鞭① 卢一凡 邓继先 刘广田 一 一 — — (j2 一 (军事医学科学院生物工程研究所。北京 ．100071) 从分子水平研究作物优良性状基因的结构与功能，首先是如何获得这些优质基因。遗传育 种工作者在长期的工作中，已培育出众多的优 良品种，这些优 良品种中很多具有抗逆、抗病、优 质、高产等优 良性状。这为我们分离这些基因并充分利用提供了良好的材料。这些基因与其它 基因一样分布于不同的染色质区并组成庞大的基因组，如何定位它们所在的染色体及染色体上 的不同区域，是分离这些优质基因的前提。染色体分带技术的发展以及原位杂交技术的广泛利 用，使对这些优质基因在染色体上的进行准确定位成为现实，从而可能对这些优质基因在分子水 平上进行操作。 1 染色体分带和原位杂交概况 染色体显带是一项借助于某些特殊的染色程序使染色在一定部位内显现出深浅不一带纹的 细胞学技术。由于特定染色体有其特定的带纹，因此显带可作为鉴别染色体组和单个染色体的 手段，从而可以深入地认识染色体结构成分遗传的关系 。在生物细胞染色质中，有常染色质与 异染色质之分，异染色质多是遗传功能失活的部分。在显带过程中经碱处理发生变性，DNA双 链解开，由于复性快慢不同而染色不一致。异染色质要 比常染色质复性快，因此染色较深，从而 在染色体上出现深浅不一的带纹 【1j。 显带技术白19 年应用于植物后，使植物核型分析更加准确，能够正确地鉴别染色体组和 单个染色体。根据核型分析来比较物种之问的染色体组带型，解决了诸多系统发育方面的疑难 问题，并可鉴别植物之间的亲缘关系。另外，还可准确鉴定由于外界因素的影响(如辐射诱变和 化学诱变)导致染色体结构上的变化…。同时也可作为远缘杂交和染色体工程中细胞学鉴定的 手段 J。不仅如此，显带技术还可以比较单干染色体和原始亲本染色体的结构差异， 此推断异 染色体的结构完整性，其价值是不可估量的。但在有些情况下，只依靠显带尚不能识别整／卜染色 体臂，这就使得只有部分异源染色体易位的易位片段的鉴定变得困难。在这种情况下，原位杂交 技术使得鉴定异染色质数量、易位断点和易位点成为可能。 原位杂交利用带标记的探针同组织、细胞或染色体的DIA进行杂交，从而对细胞中的待测 核酸进行定性、定位或相对定量分析。当进行原位杂交时，DNA分子经过高温或碱处理后，双链 艇链产生两条单链，温度下降或 pl-I恢复到中性，单链会按照碱基互补配对的原则，重新形成氢键 恢复到原来的双链结构。如果两条单链的来源不同，只要它们之间的碱基序列是同源互补或部 分同源互朴的，就可以全部或部分复性，产生分子杂交。 害矗 晕茬妻 医学科学院心血管赢研究所生化室，北京，l00o37 14 生物技术通报 1998年 2期 首次原位杂交研究是由Call和Pardue(1969)及John等(1969)开展的。他们用放射性同位素 标记探针来检测细胞制片中的rDNA。Pardue等(1970)以小鼠卫星DNA为模板，利用体外合成 的RNL为探针，以H作为标记物与中期染色体标本进行原位杂交，然后通过放射 自显影及 Gie~a染色，发现小鼠卫星DNA主要分布在结构异染色质区。Evans(1974)第一次把染色体显 带技术应用于原位杂交，提高了定位准确性，Yunis等(1978)将重复序列28s—