面包酵母流加培养及分批培养试验.docVIP

面包酵母流加培养与分批培养试验 l 实验目的及要求 (1)发酵罐及管路、空气过滤器灭菌操作及发酵罐系统管路的熟悉 (2)实罐灭菌培养基灭菌实验 (3)观察并记录酵母菌扩培过程及上罐发酵过程菌种生长变化情况 (4)测定酵母培养过程中还原糖、总糖、pH和酵母浓度的变化，并画出各自的变化曲线 (5)分析测定面包酵母的发酵活力。2实验原理 面包酵母(分子式：C372H6.11O1.45N0.61+P0.035+K0.051+5.6g其它物质)培养是最典型的细胞物质生产过程。利用葡萄糖为碳源，通风培养面包酵母的微生物反应过程可用下列化学平衡式表示： 667CH2O+2.10O2→C3.92H6.5O1.94+2.75CO2+3.42H2O (碳水化合物) (酵母菌体) 200 67.2 84.6 121 61.6 如果在酵母体内再计入除碳，氢，氧以外的其它无素如氮，磷200g碳水化合物约可得到100g干酵母。即得率约为50％。 在通风供氧充足的前提下，培养基中葡萄糖的浓度是限制性基质。培养基中葡萄糖的浓度对于提高酵母得率是至关重要的。 培养方式分为分批培养、分批补料(流加)培养和连续培养。本实验面包酵母培养的目的是获得最大酵母浓度。因此采用流加培养较为理想。其原理是所谓的反巴斯德效应(ABTREE)：酵母培养过程中，糖浓度过高时．即使溶解氧很充足，但由于糖生成乙醇，从而使菌体得率下降 分批培养(Batch culture)： 分批培养是微生物在特定条件下只完成一个生长周期(growth cycle)的方法，即接种少量微生物在一密闭系统中生长繁殖，直到某些营养物耗尽或某些产物积聚到毒害浓度为止。生长中微生物群体所经历的几个生长阶段分别为迟滞期(1ag phase)。对数生长期(exponential phase)，稳定期(stationary phase)，死亡期(death pase) 营养物质(底物)的浓度与组成影响微生物培养的生长速度，对微生物的生长起限1949年莫诺(Monod)发现微生物比生长速率与单(Monod)方程： μ：比生长速率，单位菌体在单位时间的增殖量(h-) μm：最大比生长速率(h-) K m：微生物对底物的半饱和常数(gL) S：单一限制性底物浓度(gL) 在从对数生长期与稳定期变化的过程，可称为减速期，此时细胞比生长速率和限制性Monod方程。 (Fed-batch culture) 分批补料培养是Yoshida等(1973)创用的，是指分批培养过程中连续地补加培养基， 分批补料培养中当达到最大菌体浓度时开始补加培养基，且流加培养基速率与底物被(Quasistady state)。 A．当以恒速流加培养基达到准稳态时： D随时间而下降。 式中 X菌体浓度(gL) Yx/s：基质对菌体转化率(gmo1)，一般以葡萄糖为基质酵Yx/s约为90g／ol。 B．上述的恒速流加在一些次级代谢产物的生产中可以用到，但在以菌体为目的的培养就 理想的变速流加时体积与补料速度变化为： 醪液体积 补料速度 所谓Crabtree效应即Crabtree(1929)发现，面包酵母的呼吸活力对游离的葡萄糖十5μg/L时即出现阻遏作用。为获得最大酵母得率，不能用恒速流加的酵母斜面培养基10°麦芽汁固体斜面，pH50 3.2.2 酵母摇瓶培养基10°麦芽汁，pH5.0或葡萄糖10，玉米浆1，尿素O.2，pH50。 3.2.3 酵母分批发酵培养基玉米粉经液化、糖化，折合葡萄糖浓度为10%，玉米浆1，0.4%，pH5。酵母分批发酵培养基(学生讨论提出)实验仪器、设备升发酵罐；摇瓶机(或摇床)超净工作台离心机显微镜分光光度计三角瓶。实验过程分批培养总流面培养斜面培养基配制与灭菌，接种，培养 所需仪器物品：灭菌锅试管，棉塞，培养基原料，培养箱 300毫升种子液，500ml三角瓶三只装液100ml，培养基，培养摇瓶，纱布。 上罐培养 (糖)糖化液稀释至l浓度，添加辅料 ↓ 菌体分 离心机或板框过滤器面500ml三角瓶摇瓶培养基发酵罐培养温度28，搅拌00rpm，通镜检分批补料培养(学生讨论提出) 要求分析决定初始体积V，比生长速率及菌体浓度X的测量，补料速度F与补料浓度SF的计算与控制。实验分析项目和方法 酵母镜检； 2）酵母浓度测定(湿重法)：吸取ml菌液，2500rpm离心5in，去上液，称量菌体湿重 3）还原糖浓度：(见) （4）酒精度的测定：（气相色谱法或比重法） （5）发酵活力的测定(选做)：称取026g鲜酵母，加5g在30