第8章蛋白质分析和膜泡转运.ppt

第8章 蛋白质分选与膜泡运输 主讲：张东旭 副教授 电话Email:154007630@ 第一节 细胞内蛋白质的分选 一、信号假说与蛋白质分选信号 蛋白质的分选（protein sorting） 信号序列的发现和证实 1972年Milstein等发现骨髓瘤细胞中提取的免疫球蛋白分子的N端要比分泌到细胞外的免疫球蛋白分子N端的氨基酸序列多出一截。 1975年Blobel和Sabatini等提出了”信号假说“ 布洛贝尔因为发现“蛋白质具有控制其在细胞内转移和定位的信号”而获得1999年度诺贝尔生理学/医学奖。 蛋白质分选的基本途径 1. 翻译后转运途径：在细胞质基质游离核糖体上完成多肽链合成，然后转运至膜围绕的细胞器，如线粒体、叶绿体、过氧化物酶体、细胞核及细胞质基质的特定部位。 2. 共翻译转运途径：蛋白质合成起始后转移至粗面内质网，新生肽边合成边转入粗面内质网腔中，随后经高尔基体转运至溶酶体、细胞膜或分泌到细胞外，内质网与高尔基体本身的蛋白也是通过这条途径分选的。 蛋白质分选转运的4种基本类型 跨膜转运：主要指再细胞质基质中合成的蛋白质转运到内质网、线粒体、质体（包括叶绿体）和过氧化物酶体等细胞器。 膜泡运输：蛋白质通过不同类型的转运小泡从糙面内质网合成部位转运至高尔基体，进而分选转运至细胞的不同部位，其中涉及各种不同的运输小泡的定向转运，以及膜泡出芽与融合的过程。 选择性的门控转运：在细胞质基质中合成的蛋白质通过核孔复合体选择性地完成核输入或从细胞核返回细胞质（核输出）。 细胞质基质中蛋白质的转运：可能与细胞骨架系统相关。 第二节 膜泡转运 一、膜泡运输概观 1. 蛋白质在rER 合成，通过共翻译转运途径跨膜运输 2. 内质网出芽，形成转运膜泡并与高尔基体融合 3. 从高尔基体顺面膜囊和高尔基体顺面网状结构到rER的逆向运输 4. 高尔基体膜囊从顺面→反面成熟递进（非膜泡过程） 5. 从高尔基体后期膜囊→早期膜囊的逆向运输 6. 组成型分泌 7. 调节型分泌 8. 分选到溶酶体 9. 胞吞途径 蛋白质的分泌与胞吞途径概观 三种包被的膜泡 COPⅡ（coat proteinⅡ ） 包被膜泡 COPⅠ（coat proteinⅠ）包被膜泡 网格蛋白/ 接头蛋白（clathrin/ adaptor protein）包被膜泡 三种包被膜泡特征比较 二、COP Ⅱ包被膜泡的装配与运输 COPⅡ包被蛋白组分 小分子GTP 结合蛋白Sar1 Sec23/Sec24 复合物 Sec13/Sec31 复合物 大的纤维蛋白Sec16 细胞质中可溶性 Sar1- GDP 与ER 膜蛋白Sec12（鸟苷酸交换因子）相互作用， 催化GTP 置换GDP 形成Sar1-GTP，GTP 的结合引发 Sar1 构象改变暴露出疏水N 端并插入ER 膜，膜结合Sar1 对包被蛋白进一步装配起募集者作用 小分子GTP 结合蛋白Sar1 1. Sar1与膜结合GTP交换 2. COPⅡ包被装配 3. GTP水解 4. COPⅡ包被去装配 Sar1 蛋白在CopⅡ包被膜泡装配与去装配中作用 在内质网与高尔基体之间，分别由COPⅡ和COPⅠ膜泡介导蛋白质顺向和逆向转运 不同类型的膜泡运输 KDEL 受体在从高尔基体回收内质网腔驻留蛋白中的作用 不同类型的膜泡运输 在供体膜内质网出芽及其转运蛋白的包装示意图 不同类型的膜泡运输 三、COP Ⅰ包被膜泡的装配与运输 COPⅠ包被含有7 种不同的蛋白质亚基和一种调节膜泡转运的 GTP 结合蛋白ARF。ARF 也是一种结合 GDP/GTP 转换的分子开关调控蛋白。包被蛋白复合物 的装配与去装配依赖于ARF 所结合的核苷酸交换与水解过程 KDEL 的受体主要定位在高尔基体TGN 区、COPⅡ和COPⅠ包被膜泡的膜上，它们能识别并 结合KDEL 分选信号。如果在内质网发 生错误包装和转运，由于COPⅠ膜泡上也有KDEL 受体，所以也能保证逃逸蛋白被内质网回收 KDEL 的受体 四、网格蛋白/接头蛋白包被膜泡的装配与运输 网格蛋白/ 接头蛋白包被膜泡介导的蛋白质分选途径 从高尔基体TGN向胞内体或向溶酶体、 黑（色）素体、血小板囊泡和液泡的运输 受体介导的胞吞途径中负责将物质从细胞表面运往胞内体转而到溶酶体的运输 网格蛋白及其包被膜泡的形成 五、转运膜泡与靶膜的锚定与融合 ① 供体膜的出芽、装配和断裂，形成不同的包被转运膜泡 ② 在细胞内由马达蛋白驱动、以微管为轨道的膜泡运输 ③ 转运膜泡与特定靶膜的锚定和融合 过 程 胞质中Rab 蛋白在特异性鸟苷酸交换因子（GEF）催化下，Rab-GDP 转换为Rab-GTP，构象改变致使其通过类异戊二烯基团插入转运膜泡表面，与靶膜上Rab 效应器结