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单克隆抗休及其在动物的应用现状分析 摘要：单克隆抗体技术对现代生命科学研究的发展起到巨大的作用，本文着重介绍了单克隆抗体的研究进展及在动物的应用现状分析. 关键词：单克隆抗体；研究进展；诊断；应用 单克隆抗体(monoclonal antibody，McAb)技术，是将骨髓瘤细胞和经某种抗原诱导产生的特异性B细胞，经PEG等融合剂作用，亦可经电融合或激光融合，形成杂交瘤细胞，经筛选分离出单个杂交瘤细胞，再将其扩增，最终分离纯化抗体的过程。杂交瘤细胞具有双重特性，既能如骨髓瘤细胞般持续繁殖，又能如B细胞般分泌针对单一抗原表位的特异性抗体。这种由克隆化的B细胞杂交瘤分泌的针对单一抗原表位的抗体即为单克隆抗体。与多克隆抗体相比，具有成本低、特异性和纯度高、均一性好等优点。 1 单克隆抗体的研究进展 1.1单克隆抗体技术的基本原理 要制备单克隆抗体需先获得能合成专一性抗体的单克隆B淋巴细胞，但这种B淋巴细胞不能在体外生长。而实验发现骨髓瘤细胞可在体外生长繁殖，应用细胞杂交技术使骨髓瘤细胞与免疫的淋巴细胞二者合二为一，得到杂种的骨髓瘤细胞。这种杂种细胞继承两种亲代细胞的特性，它既具有B淋巴细胞合成专一抗体的特性，也有骨髓瘤细胞能在体外培养增殖永存的特性，用这种来源于单个融合细胞培养增殖的细胞群，可制备抗一种抗原决定簇的特异单克隆抗体。 1.2 鼠源性单抗 自单克隆抗体制备技术问世以来，制备单抗的一般程序基本相同，从超免疫的供体中即抗原免疫的小鼠，获取脾细胞，再与骨髓瘤细胞融合，最后对单个细胞进行克隆，培养出能分泌单抗的克隆细胞。目前生产的单抗大是鼠源性的，但其在临床应用方面还存在着很大的弊端，主要是鼠源单抗与NK等免疫细胞表面Fc段受体亲和力弱，产生的抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用(ADCC)作用较弱，而且它与人补体成分结合能力低，对肿瘤细胞的杀伤能力弱，并且鼠源性抗体在人血循环中的半衰期短，它发挥AD-CC作用的时间较短；其次鼠单克隆抗体还具有免疫原性，使宿主易引起过敏反应。这样一方面降低了单抗的效价，另一方面又会给病人带来严重的后果。因此鼠源性单克隆抗体还应进一步改善才能广泛应用于临床。 1.3人源化抗体 由于嵌合抗体异源性仍然很大，因此需要对鼠源抗体进行人源化改造，进一步人源化的方法很多，主要是重构抗体和表面重塑技术。重构抗体就是互补决定区(complementarity determining region，CDR)移植，将鼠抗体CDR移植到人抗体的相应部位，这样人源化程度可达90％以上，目前该方法是人源化单抗最常用、最基本的方法。而表面重塑技术，即将鼠抗体框架区表面氨基酸的残基(surface amino acid residues，SAR)进行人源化改造。该方法是仅与人抗体SAR差别明显的区域，在维持抗体活性并兼顾减少异源性基础上选用与人抗体表面残幕相似的氨基酸替换。 1.4 人源性抗体 虽然人源化抗体解决了鼠抗体的免疫原性等问题，但生产人源化抗体仍有很大的困难；人源化过程需大量繁复、昂贵的电脑模拟，需取代不同的氨基酸以恢复选择性和亲和力，工作量非常大，并且它总还含有少量鼠源性成分。完全的人源性抗体才是用于治疗的理想抗体，目前它主要通过3种途径来研制：噬菌体抗体库技术、核糖体展示技术和转基凶小鼠制备人源性抗体。 1.4.1核糖体展示技术 在1994年，Mattheakis体外核糖体展示随机肽系统，利用“多肽一核糖体一mRNA”复合物将肽库构建在多核糖体上，借助多核糖体在体外将基因型和表型联系起来。1997年，Hanes和Plukth等在此基础上加以发展和完善，建立了核糖体展示技术。它的基本原理是通过PCR扩增目的基因的DNA文库，同时加入启动子、核糖体结合位点及攀环，并置予具有耦联转录／翻译的无细胞翻译系统中孵育，是目的基因的翻译产物呈现在核糖体表面，并形成“mRNA一蛋白质一核糖体”三元复合体，最后通过常规的免疫学检测方法，通过固相化的靶分子直接从三元复合体中筛选出感兴趣的核糖体复合体，再利用RT—PCR扩增，经过多次循环过程，最终筛选出高亲和力目标分子。由于此技术是一个完全在体外进行转化和筛选的过程，其中的每一步包括所有的复制、扩增、转录、筛选均在体外完成，因此可以构建超大容量的库容，也可以联合使用一些特殊的PCR技术。利用核糖体展示技术可以获得高特异性、高亲和力的抗体。 1.4.2基因工程小鼠制备全人抗体 制备全人抗体的基因工程小鼠包括人外周血淋巴细胞一严重联合免疫缺陷小鼠(hu—PBL-SCID小鼠)、转基因小鼠和转染色体小鼠制备人抗体技术。Hu—PBL-SCID小鼠是将已产生一定免疫反应的供者或癌症患者的人的外周血淋巴细胞移植于严重联合免疫缺陷小鼠(SCID)，经抗原免疫后可获得人源抗体。转基因小鼠：转基