第8章液固-液液色谱法.pptVIP

第八章 高效液相色谱法;主要内容;一、液－固吸附色谱法;1、液－固吸附色谱法的定义 ;2、液－固吸附色谱法的固定相;在吸附色谱中，最常用的吸附剂是硅胶，其次是氧化铝，此外还有高分子多孔微球（有机胶）、分子筛及聚酰胺等。 固定相按极性大小分类如下： ;硅胶的性质;硅胶表面的活性作用点; ;性能;（1）无定形全多孔硅胶 ;（2）球形全多孔硅胶 ;（2）球形全多孔硅胶;氧化铝 ;3、液－固吸附色谱法的保留机理 ; 在吸附色谱体系中，溶剂分子和溶质分子均能被吸附于吸附剂的活性位点上，当流动相流过固定相时，样品组分分子与流动相分子竞争吸附剂表面吸附中心，同时，样品中不同组分分子也在竞争吸附中心。 一是由Snyder和Soczewinski提出的竞争模式（competition model）。 二是由Scott和Kucera提出的溶剂作用模式（solvent initeraction model）——“双层吸附模型” 。;竞争模式 ;双层吸附模型 ;;组分分子中的极性官能团与固定相表面上活性作用点（如硅羟基）之间的相互作用强弱决定了它的竞争能力，即保留程度的大小，这种极性相互作用的强弱归纳如下表所示。 ;硅胶上各类化合物或官能团吸附强弱的分类 ;一般保留规律 ;4、液－固吸附色谱法的流动相 ;;（1）混合溶剂 ;流动相主体：弱极性的戊烷、己烷、庚烷等。;（2）水的影响 ;5、液－固吸附色谱的应用;（1）异构体的分离 ;（2）样品预处理 ;（3）制备色谱 ;（4）常用于HPLC-GC联用技术 ;二、液－液分配色谱法;1、液-液分配色谱法的定义;流动相极性小于固定相极性的液－液色谱法称为正相液－液色谱法，如以烷烃作为流动相，以含水硅胶作为固定相的色谱系统。正相液－液色谱法适合于分离极性化合物。 流动相极性大于固定相极性的液－液色谱法称为反相液－液色谱法，如以水为流动相，烷烃为固定相的色谱系统。反相液－液色谱法适合于分离芳烃、稠环芳烃及烷烃等化合物。 这两种系统由于固定液易流失、重复性差，已被键合相色谱法所代替，但正相液－液分配色谱法在薄层色谱法中还广泛使用。;;(1)载体 ;多孔层微珠 ;理想的载体应该具有如下特点： 孔容大； 孔径应为100～500埃之间。孔径太小，较大的分子可能被完全排阻，而保留时间更短，分离不佳；孔径太大，则固定液易流失，柱稳定性差，由于毛细管作用，固定液在小孔要比大孔内保持的好。;(2)固定液 ;液－液分配色谱法的固定液的选择也可参考纸色谱法中使用的体系或从多组分中萃取已知组分的分配体系。如在纸色谱里，甾体药物可以在浸渍甲酰胺的纸上容易地分离，如果把甲酰胺涂在硅胶上，那么甾族化合物就能用高效液相色谱分离，因为甲酰胺即使在中等极性的溶剂苯、二氯甲烷中也几乎是不溶解的。 载体的涂渍采用GC中常用的固定液涂渍方法。;3、液－液分配色谱法的保留机理;分配色谱过程与两种互不相溶的液体在一个分液漏斗中进行的溶剂萃取相类似。 当流动相体积和固定液体积一定时，物质在固定液中的溶解度越大，分配系数越大，保留时间越长；反之，在固定液中的溶解度越小，分配系数越小，保留时间越小。 ;4、液－液分配色谱法的流动相;三、正相硅胶反相洗脱色谱法;NS/RE的简介;1、固定相;2、保留机理;3、流动相;4、影响色谱保留因素 ;碱性组分的保留随缓冲盐浓度的增加（离子强度增加）而减少，这与典型的离子交换系统类似。 ;pH值对NS/RE的色谱保留具有两面性。随pH值的增加，碱性药物的保留先增加后减小??;在实际操作中流动相的pH值以6～7为好。 原因有三： ① pH太低，硅羟基失去离子交换能力； ② pH值太高，弱碱性药物不易离子化； ③ pH值太高，硅胶在碱性溶液中有一定的溶解度。;4、影响色谱保留因素;5、柱子的培养 ;6、正相硅胶/反相洗脱的应用 ;例;Thanks for your attention!