试验植物学功课.docVIP

实验动物学作业 化学药物诱发Ⅰ型糖尿病动物模型 姓 名：刘军芳 学 号：201209 所在单位：莒南县人民医院 Email：sunshine1129114@163.com 2012 年 10 月 10 日 一、模型制作原理 四氧嘧啶（ALX）产生超氧自由基而破坏β细胞，导致胰岛素合成减少，胰岛素缺乏。其作用可能与干扰锌的代谢有关。豚鼠具有抗药性。四氧嘧啶引起的血糖反应分三个时相，开始血糖升高，持续约2h，继而因β细胞残存的胰岛素释放引起低血糖约6ｈ，12ｈ后开始持久的高血糖。链脲佐菌素（STZ）能够选择性损伤胰岛β细胞，引起实验性糖尿病。给猴、狗、大鼠和小鼠等注射链脲佐菌素后，血糖水平的改变也可分为三个时相：①早期高血糖相，持续约1～2小时，乃此药抑制胰岛释放所致；②低血糖相，持续约6～10小时，可能是由于胰岛β细胞破坏，大量胰岛素释放，是血糖显著降低；③24小时后出现稳定的高血糖相即糖尿病阶段，此时大部分胰岛β细胞已呈现不同程度的损伤和破坏。与四氧嘧啶糖尿病不同，链脲佐菌素引起的糖尿病高血糖反应及酮症均较缓和。二、实验动物 SD大鼠20只，体重200-280g，雄性。 三、实验试剂及仪器 四氧嘧啶，链脲佐菌素，柠檬酸、柠檬酸钠、双蒸水、锡纸、注射器、PH计、灭菌瓶、采血针、血糖仪。 四、模型制作方法 配制柠檬酸缓冲液，柠檬酸2.1g+双蒸水100ml配制成A液，柠檬酸钠2.94g+双蒸水100ml配制成B液。同时将A、B按比例混合，PH计测定PH值，调节PH值在4.2-4.5之间，即是所需配制的STZ的柠檬酸缓冲液。将大鼠禁食12小时，过夜禁食后称重，按大鼠总重量比称取STZ，放一干燥灭菌瓶内，外用锡纸包好，将柠檬酸缓冲液及装STZ的瓶子置冰浴，一起带到动物房。每组10只小鼠，用柠檬酸缓冲液溶解STZ，按空腹体重注射STZ，在30分针内注射完毕。实验组：通过腹腔注射12mg/ml的STZ+柠檬酸钠+20mg/ml的ALX+蒸馏水各0.5ml，对照组：注射等量柠檬酸钠+蒸馏水。空腹1小时后饲以标准饲料块，自由饮水。于给药后3天、1周分别采血测血糖。 五、模型检测指标（一）一般性指标 糖尿病时会导致动物摄食量、饮水量增加和血清葡萄糖、胆固醇、甘油三酯、游离脂肪酸、糖化血红蛋白、乳酸分泌增高，而血清胰岛素、红细胞胰岛素受体最大亲和力、糖耐量降低。测定上述指标可反映实验动物是否产生高血糖或患糖尿病。（二）生化和免疫学指标 可应用ELISA测定TNF-α、INF-γ、IL-４等细胞因子和免疫球蛋白IgE（反映细胞凋亡情况）；还可测定内皮素（ET）和NO（反映氧自由基产生情况）、Ang-Ⅱ和（AT-１）mRNA（反映血管变化及间接反映氧自由基产生情况）、IGF-１即胰岛素样生长因子-１和瘦素（了解胰岛素的分泌,间接反映氧自由基情况）、AGEｓ即糖基化产物（反映体内氧化应激和糖基化反应情况）、PAH即苯丙氨酸羟化酶（反映糖异生的快慢）、GAD即谷氨酸脱羧酶抗体（该抗体阳性，表明细胞自身免疫性破坏）、胰岛素抗体（抗体阳性，说明胰岛素分泌不足）、Ｃ肽（反映胰岛β细胞的功能）等。六、模型评价 用四氧嘧啶诱发的糖尿病模型类似人类Ⅰ型糖尿病，方法简单，成模率高，但是具有刺激胰岛素分泌的药物及胰岛素增敏作用的药物在此模型无降低血糖作用，造模死亡率较高，同时也致肝、肾组织中毒性损害，部分动物高血糖自然缓解。STZ诱发的糖尿病动物模型类似人类Ⅰ型糖尿病，STZ对一定种属胰岛β细胞选择性的破坏，可使许多动物产生糖尿病。由于其对组织毒性较小，动物存活率高，但价格昂贵。该模型既克服了ALX的毒性作用，又解决了STZ价格昂贵的弊端。