YeastRNAisoKit-宝生物工程.PDF

Yeast RNAiso Kit Code No. 9751 运输温度：4℃ 包 装 量：100 次量 保存温度：4℃ 制品说明 实验操作 本制品主要应用于酵母菌 Total RNA 的提取。本制品中的 Yeast 1. 酵母细胞的裂解。 RNAprep Buffer 在适当的温度下能够去除酵母菌的细胞壁，从而 * ① 取 1 ml OD600 值为 1.5～2.5 液体培养的酵母菌到 1.5 ml 形成原生质体，再在 RNAiso Plus 的作用下使细胞裂解，释放核酸， Microtube 中，8,000 g 4℃离心 2 分钟。 达到 RNA 提取的目的。避免了传统的液氮研磨等方法，省时省力， * OD600 最好不要超过 4.0，否则提取的Total RNA 的质量和 方便对多个样品同时进行提取。 本制品适用于毕赤酵母、酿酒酵母以及深红酵母等大多数酵母菌的 收量都会有所下降。 Total RNA 提取。经本制品提取的酵母菌 Total RNA 纯度高，很少 ② 小心弃去上清，向沉淀中缓慢加入 1 ml 冰预冷的灭菌水，用 含蛋白质及基因组 DNA，提取的RNA可以直接用于 Northern杂交、 移液枪轻轻吹打，使沉淀重悬。 斑点杂交、mRNA 纯化、体外翻译、RNA 分解酶的保护分析、 ③ 8,000 g 4℃离心 2 分钟。小心弃去上清，尽量除净液体。 RT-PCR、构建 cDNA 文库等各种分子生物学实验。 ④ 沉淀中加入 0.4 ml 的 Yeast RNAprep Buffer，用移液枪轻 轻反复吹打，使沉淀重悬。 制品内容 ⑤ 放入 30℃水浴中温浴 1 小时，其间轻轻振荡离心管 1～2 次。 RNAiso Plus 100 ml ⑥ 将离心管从 30℃水浴中取出，12,000 g 4℃离心 5 分钟。 Yeast RNAprep Buffer* 40 ml ⑦ 小心弃去上清，向沉淀中加入 1 ml 的 RNAiso Plus，用移液 RNase-free dH2O 10 ml 枪轻轻吹打，使沉淀重悬。 * 含有酵母细胞破壁酶，不可在高于 4℃的环境 ⑧ 盖紧离心管盖，漩涡振荡 2～5 分钟，至悬浊液澄清。12,000g 下长期存放，使用后应立即存放于 4℃环境下。 4℃离心 5 分钟。 ⑨ 小心吸取上清液，移入新的 1.5 ml 的 RNase-free 的 【试剂盒之外所需准备试剂】 Microtube 中（切勿触及沉淀）。 ◆ 氯仿 ◆ 异丙醇 2. 酵母 RNA 的提取。 ◆ 75%乙醇（DEPC 处理水配制） ① 向上述裂解液中加入氯仿（RNAiso Plus 的 1/5 体积量），盖 紧离心管盖，用手剧烈振荡 15 秒（氯仿沸点低、易挥发，振 RNA提取实验前的准备 荡时应小心离心管盖突然弹开）。待溶液充分乳化（无分相现 RNA制备的关键是要抑制细胞中的RNA