新型联合基质桥接大鼠脊髓横断性损伤断端促进运动功能恢复实验研究04896.pdf

1376 Chinese Journal of Reparative and Reconstructive Surgery, November 2009, Vol. 23, No.11 · · 新型联合基质桥接大鼠脊髓横断性损伤断端 促进运动功能恢复实验研究 梁洪生 1 梁鹏 1 高爱丽2 祁权 1 刘恩重 1 吴佳宁 1 徐小平 1 【摘 要】 目的 研究新型联合基质——BMSCs- 去上皮细胞羊膜（denuded human amniotic membrane，DHAM ） 桥接大鼠脊髓横断性损伤断端，促进轴突再生及提高后肢运动功能的作用。 方法 取健康产妇正常剖宫产术后自愿 捐献的羊膜，经联合消化法彻底去除表面上皮细胞制备 DHAM ，并行 HE 染色观察。健康 4 周龄雌性 Wistar 大鼠 4 只， 5 2 取骨髓行 BMSCs 分离、培养，取第 4 代细胞以 PKH26 标记后，以 1 × 10 个 /cm 密度接种于 DHAM 上制备联合基质 （BMSCs-DHAM ）。倒置相差显微镜和激光共聚焦显微镜观察BMSCs 生长状态。另取 8 周龄雌性 Wistar 大鼠 40 只， 体重 200 ～ 220 g ， 制备 T9 脊髓横断性损伤模型，随机分为 4 组，每组 10 只。A 、C 组分别用 BMSCs-DHAM 和单纯 DHAM 包裹脊髓的2 4 个 断端，B 、D 组分别于脊髓损伤中心注射 10 μL 细胞浓度为 1 × 10 个/μL 的BMSCs 和等量生理盐水。 术后 12 周采用 BBB 运动评分检测大鼠后肢运动功能恢复情况，行皮层运动诱发电位（motion evoked potential ，MEP ）测 定 ；生物素化葡聚糖胺（biopinylated dextan amine ，BDA ）顺行示踪检测及神经丝蛋白200 （neurofi lament protein 200 ， NF-200 ）免疫荧光染色观察。 结果 HE 染色显示联合消化法成功制备 DHAM 。镜下观察到BMSCs 在 DHAM 上生 长状态良好。术后 12 周，A 组 BBB 评分达（12.50 ± 1.26）分，明显高于其余各组（P 0.05 ）。MEP 测定显示，A 组潜伏 期（3.52 ± 2.45 ） ms 及波幅（480.68 ± 18.41 ）µV，恢复效果优于其余各组（P 0.05 ）。BDA 顺行示踪观察示，A 组损伤平 面以下 BDA 通过损伤部位的轴突再生率为 54.12% ± 3.30%，均高于其余各组（P 0.05 ）；且 A 组 NF-200 免疫荧光染色 亦可见大量再生轴突通过损伤部位。 结 论 新型联合基质 BMSCs-DHAM 一定程度上提高了脊髓横断性损伤大鼠的 后肢运动功能，是一种具有广泛应用前景的基质材料。 【关键词】 组织工程 BMSCs 去上皮细胞羊膜 脊髓损伤 轴突再生 大鼠 中图分类号 ： R651.2 R318.08 文献标志码 ：A A NEW COMPOSITE MATRIX BRIDGING BOTH STUMPS OF SPINAL CORD TRA