微生物的分离纯化平板分离法.PDF

微生物的分离纯化：平板分离法 微生物的分离纯化-1 目的要求 学习并掌握微生物的分离、培养 及纯化的基本方法和操作技术。 基本原理 分离与纯化：从混杂的微生物群体中获得只含某 一种或某一株微生物的过程。 平板分离法普遍用于微生物的分离与纯化。即用接种环 将菌种接至平板培养基上，或用移液管、滴管将一定体积的 菌液移至平板培养基上，然后培养。其基本原理是选择适合 于待分离微生物的生长条件，如营养成分、酸碱度、温度和 氧等要求,或加入某种抑制剂造成只利于该微生物生长，而抑 制其他微生物生长的环境，从而淘汰一些不需要的微生物。 包括稀释涂布平板法 稀释混合平板法 平板划线法 土壤由于具备了微生物所需的营养、空气和水 分，是微生物最集中的地方，所含微生物无论是数 量还是种类都是极其丰富的，因此，土壤是微生物 多样性的重要场所，是发掘微生物资源的重要基地。 本实验采用三种不同的培养基和方法从土壤中 分离细菌、放线菌、酵母菌和霉菌。 实验材料 培养基：灭菌的营养琼脂培养基（N）、高 氏一号培养基（G1 ）、虎红琼脂培养基 （M）。 无菌水，带有玻璃珠的三角瓶，无菌试管， 无菌培养皿，无菌吸管，无菌三角玻棒，天 平，记号笔等 试剂：0.01g/ml链霉素溶液,10%苯酚溶 液 实验内容 分离真菌：稀释混合平板法、虎红琼脂 培养基 分离放线菌：稀释涂布平板法、高氏一 号培养基 分离细菌：平板划线分离法、营养琼脂 操作步骤 采样： 选取校园内或校园附近地点，用无菌药匙， 将表层5cm左右的浮土除去，取5～25cm处的土 样约30g，装入事先准备好的无菌瓶内并盖好。编 号并记录地点、时间及其他环境条件。一般样品取 回后应马上分离，以免微生物死亡。 制备土壤稀释液： 1. 称取土壤5g，放入带玻璃珠的无菌三角瓶中， 加45mL无菌水，振荡20min，即为稀释10－1的土 壤悬液。 2.另取无菌试管4支，各加9mL无菌水。取已稀释 成10－1的土壤液，振荡后静止0.5min，用无菌吸 管吸取1mL土壤悬液加入一无菌水试管中，振摇均 匀，即成10－2土壤稀释液。 3.同法稀释至10－3 -10－5土壤稀释液。 稀释过程应与后面的涂布法或混匀法结合进行。 注意无菌操作。 土壤稀释液的制备和稀释液的取样 - （建议稀释到10 即可） 无菌操作 稀释混合平板法分离真菌 1.取三只无菌培养皿，在皿底用记号笔写上稀释度、组别 。 2.用无菌吸管吸取10－5、10－4及10－3土壤稀释液1ml， 分别加在三只无菌培养皿中。 3.在已熔化并在水浴锅中保温500C左右的虎红琼脂（M ）中加入硫酸链霉素溶液使其终浓度为30 μg/ml，分 别倒入上述培养皿中使之铺满皿底，轻轻转动培养皿， 使菌液与培养基充分混匀铺平，放在平坦的桌面上，待 凝。 4.凝固后，倒置于28～300C恒温培养5～7d。 5.观察分离出的真菌菌落形态。 稀释混合平板法 土壤稀释液的制备和稀释液的取样 倒平板的无菌操作 将融化的琼脂培养基,冷却至50℃左右( 以手背能忍受的温度为准) ，在酒精灯火焰 旁，右手掌心握住三角瓶的底部，左手拿平 皿并松动试管塞或瓶塞，用手掌边缘和小指 、无名指夹住拔出，灼烧瓶口。用左手的大 拇子将皿盖掀开一缝，至瓶口刚好伸入，向