专题二222动物细胞融合与单克隆抗体.pptVIP

材料1:1970年，有两位科学家做了一个人—鼠细胞融合的实验，以证明细胞膜的流动性。那么，如何实现人—鼠细胞的融合，动物细胞融合后还有什么用途呢？ 灭活病毒诱导细胞融合的原理： 病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞膜上的糖蛋白发生作用，使细胞互相凝聚，细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合。 灭活是指用物理或化学手段使病毒或细菌失去感染能力，但并不破坏这些病原体的抗原结构。 两次筛选 第一次筛选 目的：筛选出杂交瘤细胞 原理：B淋巴细胞不能无限增殖 骨髓瘤细胞的缺陷性 HAT培养基 第二次筛选 目的：筛选出能分泌相应抗体的杂交瘤细胞 方法：限稀释克隆细胞的方法，将杂交瘤细胞多倍稀释，接种到多孔细胞培养板上，使培养板的每孔中只有一个细胞，通过培养使细胞增殖，然后可用酶联免疫吸附试验法检测每孔上清液中细胞分泌的抗体类型。上清液中能与特定抗原结合的培养孔即为阳性孔，阳性孔中的细胞还不能保证是来自单个细胞，继续进行有限稀释，一般重复3、4次，直至确定每孔中细胞为单克隆细胞。 3、单克隆抗体的应用 5. 单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴细胞诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞，在这种培养基上不能存活增殖的细胞是 （ ） ①淋巴细胞 ②小鼠骨髓瘤细胞 ③B淋巴细胞自身融