杨树人工林土壤细菌DNA的提取与扩增-山东大学学报.PDF

　第４８卷　第５期 山　东　大　学　学　报　（理　学　版） ２０１３年５月　 　 　 　 　 　 　Ｖｏｌ．４８　 Ｎｏ．５　 　 　 　 　 ＪｏｕｒｎａｌｏｆＳｈａｎｄｏｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（ＮａｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅ） Ｍａｙ２０１３　 　文章编号：１６７１９３５２（２０１３）０５００２３０６　　　ＤＯＩ：１０．６０４０／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７１９３５２．０．２０１３．０５０ 杨树人工林土壤细菌ＤＮＡ的提取与扩增  倪桂萍，王延平，王华田 ，韩亚飞，桑亚林 （山东农业大学林学院，山东省森林培育重点实验室，山东农业大学农业环境与生态重点实验室，山东 泰安２７１０１８） 摘要：土壤微生物多样性反映土壤生态系统健康程度，对土壤养分循环发挥决定作用，并在很大程度上影响林地 生产力。为研究人工林长期经营对土壤微生物多样性的影响，本研究以杨树人工林为研究对象，取连作林地根际 和非根际土壤，采用ＭＯＢＩＯＰｏｗｅｒＳｏｉｌＤＮＡＩｓｏｌａｔｉｏｎｋｉｔ试剂盒提取土壤中微生物基因组ＤＮＡ，并进行１６ＳｒＤＮＡ Ｖ３区扩增。结果表明：６种杨树人工林土壤中均能提取出微生物基因组ＤＮＡ，基因组ＤＮＡ片段大于２０００ｂｐ，且 ＤＮＡ带型清晰完整，无明显降解，为后续土壤细菌的ＰＣＲ扩增提供了良好模板；６种土壤基因组ＤＮＡ在电泳图 中的亮度不一，其中 代林根际土壤（Ｂ３）微生物ＤＮＡ条带最亮， 代林非根际土壤（ＦＢ１８）微生物ＤＮＡ条带亮 Ⅰ Ⅲ －３ －３ 度最弱，经检测，Ｂ３样品ＤＮＡ含量约为６９ｎｇ·ｃｍ ，而ＦＢ１８仅有２０ｎｇ·ｃｍ 左右；选用２７Ｆ／１４９２Ｒ和Ｆ３３８ ＧＣ／Ｒ５１８两对引物，采用巢式ＰＣＲ策略，成功扩增出杨树人工林土壤细菌１６ＳｒＤＮＡＶ３区ＤＮＡ，片段大小为 ２２０ｂｐ左右。 关键词：杨树人工林；土壤细菌ＤＮＡ；巢式ＰＣＲ 中图分类号：Ｓ７１８８３　　　文献标志码：Ａ ＥｘｔｒａｃｔｉｏｎａｎｄａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｂａｃｔｅｒｉａｌＤＮＡｆｒｏｍ ｓｏｉｌｓｏｆｐｏｐｌａｒｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  ＮＩＧｕｉｐｉｎｇ，ＷＡＮＧＹａｎｐｉｎｇ，ＷＡＮＧＨｕａｔｉａｎ ，ＨＡＮＹａｆｅｉ，ＳＡＮＧＹａｌｉｎ （ＦｏｒｅｓｔＣｏｌｌｅｇｅｏｆＳｈａｎｄｏｎｇＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，ＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＳｉｌｖｉｃｕｌｔｕｒｅｏｆＳｈａｎｄｏｎｇＰｒｏｖｉｎｃｅ， ＡｇｒｏＥｃｏｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＳｈａｎｄｏｎｇＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｔａｉａｎ２７１０１８，Ｓｈａｎｄｏｎｇ，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｓｏｉｌｍｉｃｒｏｂｉａｌｄｉｖｅｒｓｉｔｙｒｅｆｌｅｃｔｓｔｈｅｄｅｇｒｅｅｏｆｓｏｉｌｅｃｏｓｙｓｔｅｍｈｅａｌｔｈ，ｐｌａｙｓａｎｉｍｐｏｒｔａｎｔｒｏｌｅｉｎｓｏｉｌｎｕｔｒｉｅｎｔ ｃｙｃｌｉｎｇ，ａｎｄｌａｒｇｅｌｙａｆｆｅｃｔｓｔｈｅｆｏｒｅｓｔｌａｎｄｐｒｏｄｕｃｔｉｖｉｔｙ．Ｕｓｉｎｇｔｈｅｒｈｉｚｏｓｐｈｅｒｅａｎｄｂｕｌｋｓｏｉｌｓｆｒｏｍｐｏｐｌａｒｐｌａｎｔａｔｉｏｎｓ， ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇｔｈｅｇｅｎｏｍｅＤＮＡｏｆｔｏｔａｌｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｂｙＭＯＢＩ