热处理对高温煎煮和低温酶法提制绿茶多糖的影响-应用化学.PDF

第２８卷 第４期 应 用 化 学 Ｖｏｌ．２８Ｉｓｓ．４ ２０１１年４月 　　　　　　　ＣＨＩＮＥＳＥＪＯＵＲＮＡＬＯＦＡＰＰＬＩＥＤＣＨＥＭＩＳＴＲＹ　　　　　　　 Ａｐｒ．２０１１ 热处理对高温煎煮和低温酶法提制绿茶多糖的影响 ａ ｂ ｃ ｄ ｃ ｃ 陈小强 　张志发　王川丕　何自强　陈建新　陈红平 ａ ｂ （中华全国供销合作总社杭州茶叶研究院　杭州３１００１６；华中科技大学同济医学院　武汉； ｃ ｄ 中国农业科学院茶叶研究所　杭州；武汉生物工程学院化学与环境工程系　武汉） 摘　要　采用复合酶法提取和二乙基氨基乙基（ＤＥＡＥ）纤维素５２（ＤＥ５２）柱层析纯化制得茶多糖复合物 ＴＰＣ１；采用煎煮提取、ＳｅｐｈａｄｅｘＧ２００柱层析纯化获得茶多糖（ＴＰＣ）复合物ＴＰＣ２。高效液相凝胶渗透色谱 蒸发光散射检测表明，ＴＰＣ１和ＴＰＣ２经９８℃水浴处理５ｈ后，ＴＰＣ１的主要均一性组分 ＴＰＣ１ａ裂变为 ＴＰＣ１ａ１和ＴＰＣ１ａ２２个组分；圆二色（ＣＤ）谱显示ＴＰＣ１在 １９４ｎｍ呈现１个正Ｃｏｔｔｏｎ效应峰，热处理后在 ２１６ｎｍ处增加１个正Ｃｏｔｔｏｎ效应峰；ＴＰＣ２经热处理后其中２种均一性组分ＴＰＣ２ａ和ＴＰＣ２ｂ未变化，ＣＤ谱 显示ＴＰＣ２在２０３、２１５和２７２ｎｍ处均呈现显著的的正Ｃｏｔｔｏｎ效应峰，经热处理后前２个峰消失。９８℃水浴 热处理改变了低温复合酶法提制的茶多糖复合物ＴＰＣ１溶液构象和均一性组分的分布，未改变沸水煎煮提制 的ＴＰＣ２的均一性组分的分布和凝胶色谱行为，但影响了其溶液构象。 关键词　茶多糖，高效液相凝胶渗透色谱蒸发光散射检测，圆二色谱，均一性组分 中图分类号：Ｏ６３６．１　　　　　文献标识码：Ａ　　　　　文章编号：１００００５１８（２０１１）０４０４５４０４ ＤＯＩ：１０．３７２４／ＳＰ．Ｊ．１０９５．２０１１．０００８７ 茶多糖（ＴＰＣ）是各类茶中含有的结合蛋白质的杂多糖复合物，是茶叶里的重要活性物质之一。ＴＰＣ ［１４］ 在降血糖、增强免疫、降血脂和抗氧化等方面具有显著功效 。不同工艺提取的多糖化学成份、均一性 组分分布及平均相对分子质量等均可能有较大的差异。ＴＰＣ提取工艺有煎煮浸提、酶法提取、超声波辅 ［５７］ 助提取、稀碱提取等 。按提取的温度可分为高温提取（如煎煮浸提）和低温提取（如复合酶法提取 等），不同的温度对茶多糖均一性组份分布和溶液构象有不同的影响。高温提取效率较高，茶多糖制备 多采用此法，关于提取温度对茶多糖的影响鲜有报道［７］，本文以低档绿茶为原料，分别采用低温复合酶 ［４，８］ ［４］ 法 和高温煎煮法 分别提取茶叶粗多糖，并经柱层析纯化获得茶多糖复合物，采用圆二色（ＣＤ）和 高效液相凝胶渗透色谱蒸发光散射检测（ＨＰＧＰＣＥＬＳＤ）技术，初步研究了２种方法提制的ＴＰＣ溶液构 象和均一性组分分布的变化情况，这对茶多糖制备过程中产品质量控制和工艺优化有指导作用。 １　实验部分 １．１　试剂和仪器 低档绿茶，由龙井４３茶树鲜叶采制，二乙基氨基乙醇（ＤＥＡＥ）纤维素 ＤＥ５２（美国Ｗｈａｔｍａｎ公 司）；ＳｅｐｈａｄｅｘＧ２００（美国Ｐｈａｒｍａｃｉａ公司）；ＵＶ２５５０型紫外可见分光光度计（日本 Ｓｈｉｍａｄｚｕ公司）； Ｊ８１５型圆二色光谱仪（日本分光（ＪＡＳＣＯ）公司）；Ａｇｉｌｅｎｔ１１００型系列高效液相色谱仪（ＨＰＬＣ）系统（美 国安捷伦公司）；ＡＬＬＴＥＣＨＥＬＳＤ２０００ＥＳ型蒸发光散射检测器（美国 ＡＬＬＴＥＣＨ公司）；ＴＳＫＧＥＬ Ｇ４０００ＰＷＸＬ型凝胶色谱柱（日本ＴＯＳＯＨ公司）。 １．２　实验方法 １．２．１　茶多糖样品的制备　复合酶法提取茶多糖参考文献［４］方法，提制得到粗多糖。按文献［８］酶 提制茶粗多糖