基因工程研究技术20102.ppt

一、The PCR in outline （PCR简介） 二、 PCR in more detail （PCR的更多细节） 三、 Research and applying of PCR （PCR技术的研究应用） 本章内容： ●即利用寡核苷酸引物在碱基不完全互补配对的情况下亦能同模板DNA退火结合的能力，在设计引物时人为地造成碱基取代、缺失或插入，从而通过PCR反应将所需的突变引入靶DNA区段。 三、PCR技术的研究应用 ACACACCAACCCACTAGAAACATGAAAACCCCTAACAAAGCCTCATTACTCTTATTCCCTCTCTTGTCCCTTTCCTTATTTATCAACCATTCCCATGCAGCAGGAATCGCTGTGTACTGGGGCCAAAACGGTGGAGAAGGCACCTTAGCAGAAGCTTGCAACACAGGAAACTACCAATATGTGAACATAGCCTTCTTGTCCACTTTTGGAAATGGCCAAACCCCACAACTCAACCTTGCTGGTCATTGTGACCCTAACAACAATGGTTGCACAGGGTTGAGCAGTGATATCAATACTTGCCAAGACCTTGGCATCAAAGAATACTCCAGTGGAAACACCAACGATTTGATCAATTCATGGAACCAGTGGATCACAGTGCCAGCTTCTCTAGTCTTCATGGGGCTTCCTGCATCTGAAGCAGCTGCTCCAAGTGGTGGCTTTGTGCCTGCTGATGTGTTAACCTCTCAGATTCTTCCTGTGATTAAACAGTCTTCAAATTATGGTGGAGTCATGCTTTGGGACAGATTCAATGATGTCCAAAATGGTTATAGTAATGCTATTATTGGAAGTGTTAATTAATTAGCTATAGACAAACTATGCATGTTATTATTCAGTTATTTAAATAATAATCACCACTACTTGTGATTGGTTTTGTTACTATGTATTGAATGTGCTGTGAACGCTAC 一种情况：待点突变的碱基处于基因的5’端或3’端引物位置，可直接在两端引物上引入点突变 1. PCR点突变技术 ACACACCAACCCACTAGAAACATGAAAACCCCTAACAAAGCCTCATTACTCTTATTCCCTCTCTTGTCCCTTTCCTTATTTATCAACCATTCCCATGCAGCAGGAATCGCTGTGTACTGGGGCCAAAACGGTGGAGAAGGCACCTTAGCAGAAGCTTGCAACACAGGAAACTACCAATATGTGAACATAGCCTTCTTGTCCACTTTTGGAAATGGCCAAACCCCACAACTCAACCTTGCTGGTCATTGTGACCCTAACAACAATGGTTGCACAGGGTTGAGCAGTGATATCAATACTTGCCAAGACCTTGGCATCAAAGAATACTCCAGTGGAAACACCAACGATTTGATCAATTCATGGAACCAGTGGATCACAGTGCCAGCTTCTCTAGTCTTCATGGGGCTTCCTGCATCTGAAGCAGCTGCTCCAAGTGGTGGCTTTGTGCCTGCTGATGTGTTAACCTCTCAGATTCTTCCTGTGATTAAACAGTCTTCAAATTATGGTGGAGTCATGCTTTGGGACAGATTCAATGATGTCCAAAATGGTTATAGTAATGCTATTATTGGAAGTGTTAATTAATTAGCTATAGACAAACTATGCATGTTATTATTCAGTTATTTAAATAATAATCACCACTACTTGTGATTGGTTTTGTTACTATGTATTGAATGTGCTGTGAACGCTAC 另一种情况：待点突变的碱基处于基因的中间位置，须借助于PCR点突变试剂盒或长片段PCR。 第二种情况点突变原理 Scheme of the PCR-based site-directed mutagenesis for the inverse SA cis-acting element TGACG (Acta Biochem. Biophy. Sinica， 2006) ●应用：在检测信号传导过程中增强子（顺式作用元件）的作用。 例如： 突变为G SA（水杨酸） 转录因子 可能相互作用 GUS 基因的上游启 动子序列 GCAGT 比较突变前后GUS的活性 2. 相对定量反转录PCR （Relative Quant