磺胺甲恶唑残留快速检测胶体金试纸条的研制.pdfVIP

维普资讯 90 中国兽医杂志 2008年 (第 44卷)第 9期 磺胺 甲嘿唑残留快速检测胶体金试纸条的研制 裴兆柱 ，郭 玮 ，周旭平 ，吴 国娟 (北京农学 院动物科学技术系 ，北京 昌平 102206) 中图分类号：$859．7 文献标识码 ：B 文章编号：0529—6005(2008)090090—02 磺胺类药物 (sulfonamides，SAs)其抗菌谱广 ， 检测猪尿 中磺胺 甲嗯唑残留的试纸条 。 能抑制大多数革兰氏阳性菌和阴性菌_l，但其半衰 1 材料和仪器 期较长 ，通过任何途径摄入均会在人体 中蓄积 ，对人 新生牛血清 (hyelone)，DMEM 培养基 (Sigma 体造成潜在危害 。我 国、美 国以及欧盟等规定动物 公司)，分泌抗 SMZ杂交瘤细胞 (本实验室制得)，包 性食品中总磺胺 以及单种磺胺药 的 MRL为 0．1 被原 (本实验 室制得)，氯金酸 (上海化学试剂厂)， ，1 r’] SMZ对照品和 BSA(Sigma公 司)，二 甲基 甲酰 胺 mg／Kg… 。 目前磺胺类药物残留的检测方法主要有酶联免 (DMF，北京化学试剂厂)，高速冷冻离 心机 (Beck 疫吸附法 (ELISA)、高效液相色谱 (HPLC)以及气 man)，透射电镜 (HITACHI)，紫外分光光度计 (北 质联用 (GC—MS)[3-53等 。但是这些方法存在检测 时 京普析通用公司)。 间长 ，费用高，技术要求高 ，不宜推广 ，不适用于现场 2 方法 检测等缺点。免疫金试纸法简单快速 、特异性强 ，不 2．1 抗SMZ单克隆抗体的制备及纯化 复苏分泌 需要仪器设备 。本研究成功研制了可以用于快速 抗 SMZ杂交瘤细胞 ，扩大培养 ，腹腔注射 Balb／c小 鼠1O。个 ／只，1周后收集腹水 。应用辛酸 饱和硫酸 收稿 日期 ：2007～1019 铵法 纯化抗体 。应用紫外分光光度计检测抗体腹 作者简介 ：裴兆柱(1982一)，男 ，硕士 ，从事药物残 留检测方 向研 水蛋 白浓度 。 究 ，E—mail：peizhaozhu@ 163．con 2．2 胶体金的烧制、标记及纯化 根据 FrensG_7 通讯作者 ：吴国娟 ，电话 ：O1OEmail：w 9288@sina． COII1．Cn 的方法取 0．01 氯金酸水溶液 100mL于三角烧瓶 菌株 3种毒素基 因都呈 阳性扩增 ，阴性对 照无特异 等。分离到的病原多数为 A 型魏 氏梭菌。本菌致 带 ，而两个分离株均扩增出 a毒素基 因的特异带 ，据 病作用主要在 于它所产生 的毒素。A 型菌主要致 此结果两个分离株均为 A型魏 氏梭菌。 死性毒素是 a毒素 。本次东北虎感染 由不同个体肠 2．4 肠毒素毒力试验 病死东北虎肠道内容物加 内容物和血便分离到的两株魏 氏梭菌经 PCR鉴定 等量无菌生理盐水混悬 ，8000r／min离 心 10min， 均为 A型 ，其产生的 a毒素对小 鼠致死。由于客观 取上清腹腔注射 5只昆明系小 鼠，每 只 0．2mL， 条件 ，未能用本动物做发病试验 ，但通过对小鼠的毒 24h内小 鼠全部死亡。A型魏 氏梭菌分离株于肝片 力试验 ，基本上 阐明了分离菌的致病性。 肉汤过夜培养 ，培养物离心取上清 ，腹腔注射 5只昆 弗 氏柠檬酸杆菌 (citrobacterfreundii)为人类 明系小鼠，每只 0．2mL，24h内小 鼠全部死亡。注 和动