生化实验常用仪器201109.ppt

生物化学实验常用仪器简介;生物化学实验 教师队伍;;实验室纪律;一、可调式微量移液器的使用;2、移液器的构造及手持姿势;3、移液器的使用;第1停点 ;卸掉的吸头一定不能和新吸头混放，以免产生交叉污染。 使用完毕，可以将移液器竖起挂在移液枪架上，但小心别掉下来。当移液器枪头里有液体时，切勿将移液器水平放置或倒置，以免液体倒流腐蚀活塞弹簧。 如不使用，要把移液枪的量程调至最大值的刻度，使弹簧处于松弛状态以保护弹簧。 勿将微量移液器本体浸入溶液中。 微量移液器的任何部份切勿用火烧烤，亦不可吸取温度高于70℃的溶液，避免蒸气侵入腐蚀活塞。 使用时要检查是否有漏液现象。方法时吸取液体后悬空垂直几秒钟，看看液面是否下降。如果漏液，原因大致有以下几方面： A、枪头是否匹配；B、弹簧活塞是否正常； C、如果是易挥发的液体（许多有机溶剂都如此），则可能是饱和蒸汽压的问题，可以先吸放几次液体，然后再移液。;吸取酸液或具腐蚀性溶液后，请将微量移液器拆解开各部位零件以蒸馏水冲洗干净，擦干后再正确组合回复原状。 最好定期清洗移液枪，可以用肥皂水或60%的异丙醇再用蒸馏水清洗，自然晾干。 若不小心使溶液进入吸管柱内时，应予以拆解，将活塞组件、吸管柱、O-ring、铁氟龙垫等各部位以清水冲洗干净后，再以酒精擦拭，擦干后再正确组合回复原状。 定期自行以天平检查准确度，若有任何问题请送厂维修。校准可以在20-25度环境中，通过重复几次称量蒸馏水的方法来进行。这是可以对手中移液器进行快速检查的一种简单方法，通过检查，来判断我们手中的移液器是否处于一种正常的工作状态。;分光光度技术;每种原子都有其独特的光谱，犹如人的指纹一样是各不相同的。根据光谱学的理论，每种原子都有其自身的一系列分立的能态，每一能态都有一定的能量。 当原子以某种方法从基态被提升到较高的能态上时，原子的内部能量增加了，原子就会把这种多余的能量以光的形式发射出来，于是产生了原子的发射光谱，反之就产生吸收光谱。这种原子能态的变化不是连续的，而是量子性的，我们称之为原子能级之间的跃迁。;吸收光谱;　吸收光谱的光谱范围是很广阔的，大约从10纳米到1000微米。在200纳米到800纳米的光谱范围内，可以观测到固体、液体和溶液的吸收，这些吸收有的是连续的，称为一般吸收光谱；有的显示出一个或多个吸收带，称为选择吸收光谱。所有这些光谱都是由于分子的电子态的变化而产生的。 选择吸收光谱在有机化学中有广泛的应用，包括对化合物的鉴定、化学过程的控制、分子结构的确定、定性和定量化学分析等。;原理;波长 10pm 300pm 200nm 400nm 800nm 500mm 1cm 1m 光谱 ?射线 X射线 紫外光 可见光 红外光 微波 无线电波 方法 光谱法 分光光度法 光谱法 核磁共振 ;光的互补性与物质的颜色;物质的颜色是由于物质对不同波长的光具有选择性的吸收作用而产生的，物质的颜色由透过光的波长决定。;蓝绿;光的互补：蓝?? 黄;物质的颜色与光的关系;吸收光谱或吸收曲线;300;透光率和吸光度; 透光率的负对数称为 吸光度 A(absorbance); 溶液对光的吸收除与溶液本性有关外，还与入射光波长、溶液浓度、液层厚度及温度等因素有关。; 1852年，Beer从实验中找到了A与溶液浓度的关系式： A = k2 c k2为与被测物性质、入射光波长、溶剂、液层厚度和温度有关的常数 ;;A = a b ?;; [例2] 一有色溶液的浓度为c ，透光率为T 。 求浓度为原来的1/2时，透光率为多少？;Lambert-Beer 定律的适用条件;偏离朗伯－比耳定律的原因;引起偏离朗伯－耳定律的原因;溶液中的化学变化引起的偏离 溶液中的化学变化如缔合、离解、溶剂化、形成新的化合物、互变异构等，使吸光度不随溶液浓度而成正比地改变，而导致偏离朗伯－比耳定律。 例如，重铅酸钾在弱酸性介质中有如下平衡： Cr2O72- +H2O 2HCrO4- 在450nm波长处测量不同浓度重铬酸钾溶液的吸光度。由于在浓度低时重铬酸根的离解度大，而浓度高时离解度小，同时由于铬酸氢根离子（HCrO4-）的摩尔吸光系数比重铬酸根离子的摩尔吸光系数要小得多，因此低浓度时重铬酸根离子的吸光度降低十分显著，这就使工作曲线偏离朗伯和比耳定律。;