混合系列蛋白激酶样结构域mlkl通过磷酸化rip3引发坏死性的膜破裂.ppt

混合系列蛋白激酶样结构域MLKL被RIP3磷酸化可引发坏死性的膜破裂 Huayi Wang,1 Liming Sun,1 Lijing Su,2 Josep Rizo,2 Lei Liu,1 Li-Feng Wang,3 Fu-Sheng Wang,3 and Xiaodong Wang1 王华翌、孙丽明、Lijing Su、Josep Rizo、刘磊、王立峰、王福生（北京302医院）、王晓东（Molecular Cell，2014） 一、前言 程序性细胞死亡在多细胞个体的成长发育过程中扮有重要作用，主要分为两种途径——凋亡和坏死，它们有着不同的形态学和生物化学变化。 凋亡主要表现为细胞体积缩小、核膜破裂、DNA降解为约180-200bp的整数倍、并最终形成胞膜包被的凋亡小体，很快被巨噬细胞和邻近细胞所吞噬。这些凋亡过程中形态学和生物化学的变化主要由一类半胱氨酸蛋白酶caspases执行。这些蛋白酶通过外在的死亡诱导信号激活，如肿瘤坏死因子受体或Bcl-2家族蛋白，它们可使原来位于线粒体膜间隙的蛋白质释放到胞浆，其中一种释放细胞色素C，与胞浆中的Apaf-1结合后激活caspases。 肿瘤坏死因子（TNF）还可诱导细胞坏死，表现为细胞肿胀、胞内细胞器变形或肿大、细胞ATP含量减少、细胞膜破裂。这种形式的坏死,又称为necroptosis，需要受体互作的蛋白激酶RIP1、RIP3的激活。研究采用RIP3敲除的小鼠证实这种形式的细胞死亡对于应答微生物感染和炎症介导的组织损伤具有重要意义。 RIP3如何引发细胞坏死以及该途径是否自然运行在人类组织中是我们理解细胞坏死面临的两大难题。RIP1, RIP3以及MLKL相互结合形成一个信号复合体，被称作“necrosome”。 且MLKL激酶结构域的357位的苏氨酸和358位的丝氨酸（人源）在细胞程序性坏死被启动后被RIP3磷酸化。MLKL是拥有激酶结构域（与RIP3结合）但无激酶功能的假激酶。MLKL敲除的小鼠被证实与RIP3敲除的小鼠对细胞坏死具有相似的抵抗能力。但MLKL磷酸化导致细胞坏死的机制目前尚不清楚。 在当前研究中，我们开发了特异性检测人类MLKL蛋白在细胞坏死途径中第357位苏氨酸和358位丝氨酸磷酸化的单克隆抗体。通过一系列的生化试验，我们发现necrosome从胞浆向质膜和细胞器膜上转位，这种转变使MLKL在磷酸化驱使的聚合后获得与脂质直接结合的能力。一旦这些变化发生在膜上，聚合的MLKL将形成膜通透性孔道，破坏膜的完整性，引起细胞坏死。 二、文章的总体模式图 三、文章的亮点 RIP3 激酶对MLKL T357/S358 位的磷酸化驱使MLKL形成寡聚物； MLKL 寡聚物从胞浆易位到 细胞器膜和质膜上； MLKL 寡聚物在细胞坏死过程中直接破坏细胞膜的完整性； MLKL 磷酸化发生在药物引起的肝损伤病人活检组织中。 四、文章结构框架流程图(主要通过7幅图展开) 1. MLKL磷酸化是细胞坏死的标志； 2. 磷酸化的MLKL在细胞坏死过程中易位到膜部分； 3. Necrosomes复合体在细胞坏死过程中转移到质膜和细胞器膜上； 4. MLKL在细胞坏死过程中形成寡聚体； 5. MLKL结合磷脂和脂质体； 6. MLKL通过在膜上形成通透性孔道引起膜泄漏和细胞坏死； 7.药物引起的肝损伤病人活检组织中检测到MLKL磷酸化信号。 图1、MLKL磷酸化是细胞坏死的标志 图2、磷酸化的MLKL在细胞坏死过程中易位到膜部分 图3、Necrosomes复合体在细胞坏死过程中转移到质膜和细胞器膜上 图4、MLKL在细胞坏死过程中形成寡聚体 图5、MLKL结合磷脂和脂质体 图6、MLKL通过在膜上形成通透性孔道引起膜泄漏和细胞坏死 图7、药物引起的肝损伤病人活检组织中检测到MLKL磷酸化信号 图7A：药物引起的肝损伤病人活检组织染色（图中显示病变部位三个临近的区域）；a为苏木精将细胞核染成蓝紫色，phospho-MLKL抗体将病变部位复染为红色；b为没有采用第一抗体染色的阴性对照；c为苏木精和phospho-MLKL抗体复染的肝损伤严重的部位； 图7B：两个健康器官移植捐赠者的肝活检组织样本的免疫组织化学染色； * * 汇报人：付玮玮 RIP1, RIP3以及MLKL相互结合形成一个细胞坏死复合体 “necrosome”；MLKL激酶结构域的T357/S358位被RIP3磷酸化；磷酸化的MLKL从单体状态向寡聚体状态转化；寡聚化的MLKL结合磷酸肌醇和心肌磷脂,整个复合体从细胞质转移到细胞膜和细胞器膜上，并在这些膜