HPLC法同时测定石蒜中加兰他敏和石蒜碱.pdfVIP

第27卷 第 11期 应 用 化 学 Vo1．27No．11 2010年 11月 CHINESEJOURNALOFAPPLIEDCHEMISTRY NOV．20l0 HPLC法同时测定石蒜中加兰他敏和石蒜碱 李 霞。 熊海蓉 蒋利华 文祝友 熊远福 (湖南农业大学。理学院，分析测试中心 ，动物科技学院 长沙410128；长沙环境保护职业技术学院 长沙) 摘 要 建立了高效液相色谱同时测定石蒜中加兰他敏和石蒜碱含量的方法。采用phenomenex-C，色谱柱， 以乙腈 (A)-0．1％TFA水溶液 (B)为流动相梯度洗脱，检测波长289nm。结果表 明，加兰他敏和石蒜碱均在 0．5—10mg／L(r=0．9999)呈现 良好的线性关系，最低检测限(S／N=3)分别为0．09和0．15m L，平均加样 回收率分别为99．53％和96．82％。该方法简单 、快速、准确，适合于石蒜中加兰他敏和石蒜碱的测定。 关键词 高效液相色谱 ，石蒜，加兰他敏，石蒜碱 中图分类号：0629．3 文献标识码：A 文章编号：1000—0518(2010)11—1362-03 DOI：10．3724／SP．J．1095．2010．00002 石蒜(LycorisHerb．)属于单子叶植物纲石蒜科 (Amaryllidaceae)植物，加兰他敏 (Galanthamine)和石 蒜碱(Lycofien)是石蒜中2种具有显著生理活性的异喹啉类生物碱 ¨引。加兰他敏可用于重症肌无力、 闭角型青光眼、术后肠肌麻痹的治疗 J，尤其是在治疗轻、中度阿尔茨海默病 (AD，老年痴呆症的最主要 表现形式)方面毒副作用小，疗效显著 引；而石蒜碱具有很强的抗病毒活性和抗肿瘤作用 ，在临床 上多用于sJ,)L麻痹后遗症的治疗 J。目前，对加兰他敏和石蒜碱 的检测方法主要有滴定法 、紫外 法 、荧光法 和HPLC法 j。滴定法灵敏度低；紫外法、荧光法 由于其它物质在测定波长下也可能 有吸收，因而无法用分光光度法确定单体的含量；HPLC法可以准确测定单体的含量，但常见于石蒜中 单一组分加兰他敏的测定，HPLC法应用于测定石蒜碱及同时测定这2种成分含量的方法 尚未见报道。 因此建立高效液相色谱同时测定加兰他敏和石蒜碱的方法具有实际意义。本文采用反相高效液相色谱 法，以加兰他敏和石蒜碱作为同步定量的指标进行测定，经方法学考察，加兰他敏和石蒜碱分离效果 良 好，方法稳定可靠。 2690型高效液相色谱仪(美国Waters公司)；phenome-Flex-C18色谱柱(2．1mmX250mm，5Ixm)； 流动相：乙腈(A)-0．1％三氟乙酸(TFA)水溶液(B)，梯度洗脱 (0～20min，5％A一14％A，95％B一86％ B；20～21rain，14％A～90％A，86％B～10％B)；检测波长289nm，流速0．5mL／min，柱温4O℃，进样量 l0 L。石蒜原料(湖南九嶷山)；加兰他敏标样(纯度≥94％，Sigma公司)；石蒜碱标样 (纯度I98％， Sigma公司)；食用级乙醇(95％)；其它试剂均为分析纯。称取加兰他敏和石蒜碱标样对照品适量，加甲 醇溶解并制成每 1mL含0．53mg加兰他敏和0．50mg石蒜碱的混合对照品溶液。称取一定量的石蒜干 粉 ，按料液 比1：6加入75％乙醇水溶液，控制温度在 65cc，加热4h，共提取 3次。离心后取上清液，回 收溶剂浓缩提取液，用氨水调节溶液pH=11，再用氯仿萃取至无生物碱反应，合并氯仿液并回收溶剂， 得加兰他敏和石蒜碱混合粗提物，称取上述提取物用甲醇溶解、定容后即作为样 品溶液。 结果与讨论 以甲醇为溶剂，采用紫外．可见光分光光度计分别扫描加兰他敏、石蒜碱和甲醇溶液，其紫外吸收光 谱见图1。图中显示，加兰他敏在 289nm处有最大吸收峰，而石蒜碱在240和292nm有2个较大峰，考 虑到二者在289nm附近均有最大吸收且甲醇在该波长下无吸收峰，对加兰他敏和石蒜碱干扰小，因此 选择289nm作为加兰他敏和石蒜碱的检测波长。 精密移取混合对照品和石蒜样品溶液各 10 L进样，色谱图见图2。图中加兰他敏和石蒜碱的出峰 时间分别为8．6和 12．4rain，与其它组分的色谱峰分离达到基线分离要求，符合定量分析的要求。