琼脂糖固载辣根过氧化物酶的直接电化学行为研究.pdfVIP

·582 · 化 学 世 界 2015正 琼脂糖固载辣根过氧化物酶的直接 电化学行为研究 李业梅 。 陈 伟 (郧阳师范高等专科学校 a．生物化学与环境工程系；b．规划建设处，湖北 十堰 442000) 摘 要 ：用琼脂糖将辣根过氧化物酶 (HRP)固定到玻碳 电极 (GCE)表面，制备 了HRP一琼脂糖膜修 饰 电极。研究发现包埋在琼脂糖膜 中的辣根过氧化物酶可与电极直接传递电子 ，在磷酸盐缓冲溶 液和磷酸盐缓冲溶液／乙醇混合液中均可得到一对辣根过氧化物酶辅基血红素 Fe(Ⅲ)／Fe(II)电 对的可逆氧化还原峰 ，式电势分别为一0．392V(vsSCE)和一0．412V(vsSCE)。式电势随缓冲溶 液 PH值增加而负移 ，且呈线性关系，直线斜率为一56．0mV／pH。这说 明辣根过氧化物酶的 电子 传递过程伴随有质子的转移。 关键词：辣根过氧化物酶；琼脂糖 ；修饰电极；直接电化学 中图分类号 ：O646 文献标志码 ：A 文章编号 ：0367-6358(2015)10—0582—03 DirectElectrochemica1BehaviorofHorseradishPeroxidase EntrappedinAgaroseHydrogelFilms LIYe—mei。 CHEN W ei (Teachers’CollegeofYunyang，a．DepartmentofChemistry；b．ConstructionPlanning，HubeiShiyan442000，China) Abstract：Horseradishperoxidasewasimmobilizedonglassycarbonelectrode (GCE)surfacebyagarose hydroge1．Horseradishperoxidaseentrappedintheagarosefilm inphosphatebuffersolutionandphosphate bufferethanolmixed solventundergoesfastdirectelectron-transferreactionswith the formalpotential (E。)of--0．392V (vsSCE)and一0．412V (vsSCE)respectively，correspondingtoFe。+ e一 Fe ． TheE叭islinearlydependentonpH ofthebuffersolutionwiththeslopevalueof一56．0mV／pH。indica— tingthattheelectrontransferisproton—coupled． Keywords：horseradishperoxidase；agarose；modifiedelectrode；directelectrochemistry 有机相电化学酶电极的操作条件较高，一是有 强键合辅基的相对分子质量约为44000的糖蛋 白。 机溶剂会改变酶的构象，导致酶催化活性的降低 ；二 HRP在室温下很稳定，且容易得到 ，价格便宜 ，是商 是有机溶剂的导 电性能差 ，影 响测定的灵敏度 。研 品化较早、应用较为广泛 的一种酶制剂 。目前 已有 究表明，在有机溶剂或水 ／有机混合溶剂 中，一些酶 多种方法将 HRP固定在不 同的电极上，用于检测 仍具有较强 的催化活性[1]，甚至有 的酶能表现 出更 过氧化氢 、酚类化合物、胺类化合物以及 HRP抑制 高的催化效率或新的催化活性 。依此可以构筑有机 剂等 ，但用琼脂糖将辣根过氧化物酶 固定到玻碳 电 相电化学酶传感器 ，以用于某些水溶性较差物质的 极表面，并研究其 电化学行为还鲜见报道 。琼脂糖 测定。