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第27卷 第 5期 应 用 化 学 Vo1．27No．5 2010年 5月 CHINESEJOURNALOFAPPLIEDCHEMISTRY May2010 甲基红共振瑞利散射法测定多肽药物奥 曲肽 范 莉 李 丹 孙 阳 胡倩倩 (西南大学化学化工学院 重庆400715) 摘 要 采用共振瑞利散射 (RRS)法测定奥曲肽，建立了测定痕量奥曲肽的方法。在 pH=3．78的 B—R缓冲 溶液中，奥曲肽与甲基红相互作用后，共振瑞利散射显著增强，在280～370Fin范围内呈现高的散射强度，且 以310nm处的△， 最强。在优化的测试条件下，奥曲肽浓度在0—0．54mg／L范围内与散射强度有 良好的线 性关系，对奥曲肽的检出限(3o-)达 3．6 rdL。该方法用于合成样品中奥曲肽的测定，回收率为 98．3％ ～ 100．7％；用于奥曲肽注射液中奥曲肽含量的测定 ，结果与HPLC法测得的结果相近。 关键词 共振瑞利散射，奥曲肽，甲基红 中图分类号：0657．6 文献标识码：A 文章编号：1000-0518(2010)05-0585-05 D0I：10．3724／SP．J．1095．2010．90413 多肽类药物是当今新药研究最活跃的领域之一¨ 。多肽药物的优势在于，用量很少，功能强大，很 少引起免疫反应，几乎没有毒性。多肽药物还克服了蛋 白质药物分子量大、制备困难等缺点。奥曲肽 (Octreotide，OCT)是人工合成的环八肽，化学名称为：D一苯丙氨酰-三一半胱氨酰一，J一苯丙氨酰-D一色氨酰一- 赖氨酢 ．苏氨酰．￡．半胱氨酰一．苏氨醇(2—7)环二硫化物，结构如Scheme1所示。它是天然生长抑素 的长效类似物(半衰期长达 2h)，其抑制激素分泌的作用 比生长抑素强大持久。目前，奥曲肽主要用于 治疗肢端肥大症 』、消化道肿瘤 』、上消化道出血 和急慢性胰腺炎 等。 H2N H H H Scheme1 Chemicalstructureofoctreotide 目前，奥曲肽测定方法有放射性免疫测定法 、高效液相色谱一质谱联用法 、高效液相色谱 (HPLC)法 ]。共振瑞利散射(ResonanceRayleighscattering，RRS)分析法具有灵敏度高、简便快速的特 点，已被广泛用于核酸 ]、蛋白质 “j、无机离子 、糖类 ¨引、药物 ¨等的分析。本研究组曾采用 RRS 技术分析多肽物质 ，但 RRS在多肽药物的分析应用上未见报道。本文研究发现，在酸性条件下，甲 基红可与奥曲肽结合并产生增强的共振瑞利散射信号，最大散射峰位于310nm，且增强程度与奥曲肽 浓度在一定范围内呈线性关系，据此建立了奥曲肽的RRS测定方法。与HPLC法相比，本法具有检测灵 敏度高、选择性好、试剂消耗少、简便快速的特点，可用于痕量奥曲肽的测定。 1 实验部分 1．1 仪器和试剂 HitachiF-2500型荧光分光光度计 (13本 Tokyo公司)，测定狭缝 5nm；pHS一3C型酸度计。奥曲肽 2009-06—19收稿 ，2009-09—14修回 西南大学发展基金 (SWUF2006001)资助项 目 通讯联系人：范莉，女，硕士，副教授 ；E—mail：hxfanl@SWU．edu．cn；研究方向：药物分析 586 第27卷 (OCT，实验室 自制)标准溶液：配制成 900mg／L的贮备液，冰箱 中4oC保存 ，用时室温下稀释至 0．9mg／L。甲基红溶液(Methylred，MR 海三爱思试剂有限公司)：配制成32mg／L的贮备液，避光保 存，实验时稀释至0．032mg／L。B—R(Britton-Robinson)缓冲溶液：用0．04moL／LH3PO4、H3BO3和HAc与