流式细胞术实验方法及应用..pptVIP

流式细胞术实验方法及应用 何 玉 萍 一、流式细胞术的原理 近30年来流式细胞术在我国得到很快的发展，应用范围不断增大。目前，流式细胞术作为一门生物检测技术广泛应用于免疫学、血液学、肿瘤学、细胞遗传学、细胞生物学、生物化学等临床医学和基础医学研究领域。 二、流式细胞术的特点、优点 速度快 　　极短时间内可分析大量细胞，每秒可检测上万个 细胞，甚至几万个细胞。 多参数分析 　　可同时分析单个细胞的多种特性，获得单个细 胞多种信息，也可以根据其细胞表面标志的不同把 细胞群分为各亚群。 常用荧光素  常用荧光探针组合 细胞表型分析： 双色分析：FITC与PE 三色分析：双色分析+PE-CY5 四色分析：三色分析+ECD DNA含量分析： PI 凋亡与坏死分析： 凋亡用Annexin V-FITC/PI双染 四、标本的收集、单细胞悬液的制备 骨髓、外周血、细胞株、组织器官、 胸水、腹水、尿液脱落细胞等 1、骨髓及外周血细胞单细胞悬液的制备 骨髓及外周血都是天然的单个细胞，可直接标记，再溶血。 2、培养细胞样品的制备(贴壁细胞) 培养板 吸去培养液 PBS洗2次 胰蛋白酶 37℃，室温，3-5min 含血清的