半胱氨酸封闭剂为电化学探针的非标记型核酸适配体传感器.pdfVIP

第3O卷 第5期 应 用 化 学 Vo1．3OIss．5 2013年5月 CHINESEJOURNALOFAPPLIEDCHEMISTRY May2013 半胱氨酸封闭剂为电化学探针的 非标记型核酸适配体传感器 杨绍明 查文玲 李 红 孙 清 刘 斌 郑龙珍 (华东交通大学基础学院化学化工系 南昌330013) 摘 要 采用半胱氨酸为封闭剂和氧化还原电化学探针 ，制备了一种新型的非标记型电化学核酸适配体传 感器，并用于测定凝血酶。利用电化学阻抗对传感器的组装过程进行了监测。用循环伏安法和差分脉冲伏安 法研究了该传感器的电化学行为。探讨了凝血酶孵育时间、测试pH值对传感器响应的影响。该传感器对凝 血酶在 10．0—10000It,g／L范围内呈 良好的线性响应，检测限为2．47 g／L。 关键词 半胱氨酸，封闭剂，氧化还原探针，核酸适配体 ，生物传感器 中图分类号：0657．1 文献标识码：A 文章编号：1000-0518(2013)05-0549-06 DOI：10．3724／SP．J．1095．2013．20299 凝血酶是一种普遍存在于哺乳动物中的凝结蛋白，人的凝血酶由分子量31kDa的A链和5．7kDa 的B链通过双硫键组成。凝血酶不仅能将纤维蛋白原转化为不溶的纤维蛋 白而形成纤维蛋 白凝胶，同 时又具有类似于激素的特性能影响血小板的活性。过多的凝血酶将诱发血栓并在心血管疾病中扮演着 重要角色…，而过少的凝血酶又将导致流血不止。凝血酶含量的检测对于疾病诊断和药物研究均十分 重要 引。传统凝血酶的检测方法主要是利用抗原-抗体之间的免疫反应，近年来，由人工合成、不依赖 于动物或细胞获得的核酸适配体在检测凝血酶方面的研究受到了极大关注 。与抗体比较，核酸适配 体对靶分子具有高度亲和力、专一性的识别能力和空间位阻小等优点，核酸适配体还具有分子量小、可 重复利用和稳定性 良好等优点 。 电化学核酸适配体传感器，由于其具有简单、快速、灵敏、成本低廉和易于实现微型化等优点，近年 来受到众多研究者的青睐_8。。。。根据是否采用标记物产生检测信号，电化学核酸适配体传感器可分为 标记型和非标记型。标记型核酸适配体传感器的标记过程复杂、花费高，而且在一定程度上会影响适配 体和 目标分子的结合亲和力 。因此，构建简单、价廉和灵敏的非标记型电化学核酸适配体传感器具 有重要的意义。 ￡．半胱氨酸(Cys)是 自然存在的唯一具有 自由巯基的氨基酸¨ ，通过巯基可以非常牢固的自组装 于金表面。目前，半胱氨酸在金电极表面组装的报道主要集中在研究半胱氨酸作为连接剂固定纳米粒 子和生物分子，及作为电化学催化剂检测底物。Wang等 研究了尿酸在Cys组装膜修饰电极上的电化 学行为。付崇岗等 14-15]研究发现，半胱氨酸在金电极表面的组装膜在0．2V附近有一对稳定的氧化还 原峰，并研究了其对抗坏血酸的电催化作用。 在制备电化学核酸适配体传感器时，2．巯基乙醇、6一巯基己醇、己硫醇和牛血清 白蛋 白常用作封闭 剂，封闭电极表面未被核酸适配体覆盖的空余位点，防止传感器表面上的非特异性吸附 j。使用上述 封闭剂的电化学核酸适配体传感器需另引入氧化还原电化学探针来检测适配体传感器结合 目标分子前 后的信号变化。本文采用半胱氨酸这种新型的封闭剂防止电极表面的非特异性吸附，同时，以封闭剂半 胱氨酸作为氧化还原电化学探针，来检测适配体传感器结合 目标分子前后的信号变化，构建非标记型电 化学核酸适配体传感器，并用该传感器研究检测凝血酶的性能。 2012-07-06收稿，2012-08-27修回 国家自然科学基金、江西省 自然科学基金 (2009GQH0022)和江西省教育厅科技项 目(GJJ12304)资助 通讯联系人 ：杨绍明，副教授；Tel：0791-7046336；Fax：0791-7046320；E-mail：yangsm@yahoo．cn；研究方向：化学／生物传感器 550 应 用 化 学 第30卷 1 实验部