第四章基因工程的主要技术及其原理1.pptVIP

第一节 DNA和RNA的提取和纯化 第二节 凝胶电泳 第三节 核酸和蛋白质的分子杂交 第四节 聚合酶链式反应技术 第五节 DNA序列分析 第六节 基因定点诱变 第七节 DNA与蛋白质互作分析 ;本章重点掌握的内容1;第一节??DNA和RNA的提取和纯化 ;第一节??DNA和RNA的提取和纯化;一、DNA提取的基本原理与方法;一、DNA提取的基本原理与方法;一、DNA提取的基本原理与方法;一、DNA提取的基本原理与方法;一、DNA提取的基本原理与方法;碱裂解法是利用共价闭合环状质粒与线性染色质体DNA在拓扑学上的差异来分离它们。碱性使质粒DNA变性，再将pH值调至中性使其复性，复性的为质粒DNA，而染色体DNA不会复性，缠结成网状物质，通过离心，染色体DNA与不稳定的大分子RNA、蛋白质-SDS复合物等一起沉淀下来而被除去。 碱性下，变性蛋白是可溶的，酸性、中性下变性蛋白不溶而沉淀。 几乎所有纯化质粒的方法都用到质粒DNA分子相对较小和共价闭合环状这两个特性。 ;溶液I (50 mmol/L葡萄糖，10 mmol/L EDTA，25 mMTris-HCl pH8.0 ) 作用：分散细胞，鳌合金属离子使金属酶失活。 溶液II (0.2mol/L NaOH, 1%SDS, 现用现配) 作用：细胞壁肽聚糖碱性下水解，核酸和蛋白质变性。 溶液