细胞培养正常组织细胞的培养.pptVIP

几种细胞培养方法举例 表皮细胞 在人和动物体内，表皮细胞生长在胶原基质膜上，并从基质膜获取生长分化所需要的物质，因此体外培养培养需要使用某些基质、培养液及包括滋养层在内的一些添加物。 几种细胞培养方法举例 无菌切取皮肤标本，用DBSS冲洗3～5遍。 将标本的上皮层面朝下放入干燥的培养皿中，加数滴PBS使之湿润，用弯剪尽可能除净皮下脂肪和结缔组织，将标本切成大约1cmX2cm的小块。 用无Ca2+、Mg2+的PBS 冲洗标本至少3次，将标本放入胰蛋白酶溶液中或中性分散酶II中，4℃放置15-48h，或37℃ 1-3h。 表皮层和真皮层分离时,表皮层为棕色，真皮层为白色，观察到表皮与真皮分离时将其一如到另一10cm塑料平皿，真皮向下，用5ml血清完全培养液冲洗，用弯镊轻轻将表皮剥脱，放入含20ml培养液的50ml离心管中，反复吹打，过100目尼龙筛，使角化上皮细胞分离。 几种细胞培养方法举例 滋养层细胞制备 在已形成单层的3T3细胞培养瓶中加入丝裂霉素，使3T3细胞不在分裂增殖，即可作为表皮细胞的黏附滋养细胞。 黏壁剂包被 用0.01%的胶原蛋白铺于培养瓶的底部，过夜，弃上清，40℃烘干，制成胶原蛋白黏附膜，紫外线照射2h消毒备用。 几种细胞培养方法举例 以1～5X105个细胞的密度接种在适量DMEM或FAD培养液中，37℃培养1-3天，细胞贴壁后，冲洗未贴壁细胞。 传代培养：0.05