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其他病原微生物分离及鉴定

一、螺旋体 (Spirochaeta) 螺旋体是一类菌体细长、柔软、弯曲呈螺旋状、能活泼运动的原核单细胞微生物。它的基本结构与细菌类似,有细胞壁、核质,以二分裂繁殖,广义上属于细菌。 抵抗力-极弱。对温度和干燥特别敏感。 对常用化学消毒剂亦敏感,1%~2%石炭酸内数分钟就死亡。 对青霉素、四环素、红霉素或砷剂均敏感。 (一)主要生物学特性 1.形态:螺旋状 ,有些可通过细菌滤器或滤膜。 2.结构:原生质柱 、轴鞭毛 、外鞘。 3.运动性:运动活跃。 4.繁殖方式:以二分裂法繁殖。 5.核酸:核酸兼有RNA和DNA。 6.染色:革兰氏阴性,但大多数不易着色。 7.培养特性:多数需厌氧培养,营养要求较高, 有些不能用人工培养基培养。 二、致病性与免疫性 二、致病性与免疫性 所致疾病 钩端螺旋体病------一种人畜共患传染病 传染源:鼠和猪 传播途径:经粘膜或破损皮肤进入; 经胎盘垂直传播 临床表现:先形成钩体血症;进入损伤全身毛细血管内皮细胞,及肝、肾、肺心及中枢神经,可出现休克、DIC、黄疸、出血、心肾功能不全、脑膜炎等。 疾病特点:起病急、高热、乏力、全身酸痛、眼结膜充血、腓肠肌压痛、表浅淋巴结肿大。 免疫性 疾病后可获得抗同型钩体的持久免疫力。 (二)、病料的采集与检查 1.材料准备 发病早期已采取家畜的血液为宜,显微镜检查和分离培养时,则应加抗凝剂;做血清检查时则不加抗凝剂。发病后期肾脏中的病原体大量增加,宜采取尿液。 2.暗视野显微镜检查 3.标本染色镜检 吉姆萨染色或方氏镀银法和钩端螺旋体媒染法较好。 (三)、分离培养 螺旋体能够在人工培养基上生长,但需用液体或半固体培养基。最常用的培养基有柯氏培养基和捷氏培养基。 接种材料为血、尿及组织乳剂。 一般培养时间10-30d,确认无钩端螺旋体生长者可弃去而判为阴性。 (四)、动物感染实验 采用幼龄豚鼠(体重150-200g)或仓鼠,腹腔注射被检样1-3mL。接种后每日测温观察两次。 (五)、血清学试验 一般采用已知抗原检查动物血清中的抗体。 凝集溶解试验具有高度的型特异性,是诊断本病最常用的方法。 凝集反应(agglutination test) 一种血清学反应。颗粒性抗原(完整的病原微生物或红细胞等)与相应抗体结合,在有电介质存在的条件下,经过一定时间,出现肉眼可见的凝集小块。参与凝集反应的抗原称为凝集原,抗体称为凝集素。可分为直接凝集反应和间接凝集反应两类。 直接凝集反应 颗粒状抗原(如细菌、红细胞等)与相应抗体直接结合所出现的凝集现象。分为玻片法和试管法。 间按凝集反应 将可溶性抗原(或抗体)先吸附于一种与免疫无关的、一定大小的颗粒状载体的表面,然后与相应抗体(或抗原)作用。在有电介质存在的适宜条件下,即可发生凝集,称为间接凝集反应。 沉淀反应(precipitation) 一种血清学反应。可溶性抗原与相应抗体结合,在有适量电介质存在下,经过一定时间,形成肉眼可见的沉淀物。沉淀反应的抗原可以是多糖、蛋白质、类脂等。 沉淀反应的实验方法大体可分为环状法、絮状法、琼脂扩散法三种基本类型。 二、立克次氏体(Rickettsia) 立克次体是一类介于病毒与细菌之间的原核细胞型微生物,在形态结构和繁殖方式等特性上与细菌相似,而在生长要求上又酷似病毒。此类微生物引起人和动物立克次体病(如Q热、斑疹伤寒、恙虫病等)。为纪念Howard Taylor Ricketts而命名。 (一)、生物学特性 1. 多形性,主要是球杆状。 2.大小介于细菌和病毒之间,多数不能通过细菌滤器。 3.革兰氏阴性,有细胞壁 4.专性细胞内寄生 5.以二分裂方式繁殖 6.对理化因素抵抗力不强, 尤对热敏感 7.主要寄生于节肢动物中, 通过叮咬感染人和动物 (二)、病料的采集与检查 根据所怀疑的疾病或检疫要求,采取立克次氏体含量较多、无杂菌污染或污染较少的适宜材料,并按无菌方法采取。病料应置于-70℃保存及时检查。 根据需要取不同形式材料。 对原始材料进行涂片染色镜检。形态学检测。 (三)、分离培养 立克次氏体的分离方法有动物或鸡胚接种、细胞培养等。 1.动物接种 选用易感性较高的实验动物。一般采用腹腔接种。 2.鸡胚接种 只感染动物的立克次氏体,不能在鸡胚中培养。 3.细胞培养 多用单层细胞培养法。 (四)、立克次氏体的鉴定 1.形态学鉴定 2.血清学鉴定 免疫荧光染色法、补体结合试验以及微量凝集实验。 三、支原体 支原体(mycoplasma):又称霉形体,为目前发现的最小的最简单的原核生物。支原体细胞中唯一可见的细胞器是核糖体(支原体是原核细胞,原核细胞的细胞器只有核糖体)。 形态与结构 支原体的大

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