组织制片技术概述2009.pptVIP

现 代 组 织 学 技 术  主讲：谈 新 提 人体解剖与组织胚胎学系 祝： 同学们 学习愉快！ 切片过程： 调节水温至47℃左右； 固定蜡块； 修整包埋面； 调节切片厚度至4—6微米； 切片； 摊片； 烤片。 切片的注意事项： ① 切片前要将切片机各部位的螺丝旋紧，否则会引起切片机各部件震动，造成切片厚薄不匀。 ② 块的切面和切片刀的倾斜度之间的夹角应按切片机刀台上的刻度作适当调整。 ③ 恒温水箱的温度应比包埋蜡的溶点低5℃--6℃。 ④ 环境温度高时蜡块容易变软。应使用冰块使蜡块的表面迅速冷却，以增加蜡块表面的硬度。 骨切片 骨组织作切片观察，必须将骨的钙质除去，仅保留软组织才能切片，这一过程就是“脱钙” 。 脱钙 将厚约2~3mm的骨片放入脱钙剂中24~48小时 脱钙剂 ： 浓硝酸 5 ml 尿素 3~5g 蒸馏水 100 ml 脱钙后可按一般组织标本的脱水、透明、包埋、切片及染色过程进行处理。 骨髓切片、冰冻切片 染料和染色 染料 是指分子中含有发色团和助色团的有机化合物，有鲜艳的色彩，对于组织有极强的亲和力。 根据来源可分为两类： 天然染料（卡红、苏木精） 人工合成染料（苦味酸、桔黄G） 根据其化学性质分为： 碱性染料(basic dye) 酸性染料(acid dye) 中性(neutrophilia)染料 染色的原理 化学反应 在组织细胞内一般认为都含有酸性物质和碱性物质。染色时酸性物质与碱性染料中的阳离子结合，碱性物质与酸性染料中的阴离子结合。在细胞核中主要由酸性物质组成（如核酸等），所以与苏木精等碱性染料有很强的亲和力。细胞质主要由硷性物质组成，所以与伊红等酸性染料有很强的亲和力。能被碱性染料着色的物质称为嗜碱性(basophilia)物质，能被酸性染料着色的物质称为嗜酸性(acidophilia)物质。 物理反应 —— 吸附作用 媒染剂、促染剂和分化剂 媒染剂 凡能增强染料对组织的着色能力，其本身又能与染料或组织发生结合的化学试剂称为媒染剂。如配制各种苏木精染色液时添加的钾明矾、铵明矾等。 促染剂 能增强染料对组织的着色能力，但本身并不参与染色反应。如伊红染色液中添加的冰乙酸等。 分化剂 能除去组织上和切片上过染的染色液。分化剂又分为酸性分化剂，例如低浓度的盐酸，醋酸等。氧化分化剂例如高锰酸钾，重铬酸钾等。媒染分化剂如铁明矾等。 封固和封固剂 封固 （目的是什么?) 组织切片制片的最后一道程序是滴加封固剂，用盖玻片复盖于载有组织片的载片上，以利于镜下观察，并借以阻断组织片与外界的接触，从而防止组织片脱片、受潮、干裂、机械磨损等，延长切片的使用时间，这一步骤称为封固。封固分为干封和湿封两种。 * * 内 容 组织制片的意义