丁苯酞预处理对脑缺血再灌注海马神经元的保护作用.pdfVIP

中 文 摘 要 丁苯酞预处理对脑缺血再灌注海马神经元的保护作用 摘 要 脑血管疾病(CVD)是全球目前发病率、病死率和致残率最高的一类 疾病，其死亡率仅次于心脏系统疾病和癌症。其中缺血性脑血管疾病 (ICVD)在脑血管各种疾病中发病率最高。研究发现，脑缺血发生后有相 当多患者闭塞的血管能自然再通或经溶栓后恢复再通，但部分脑缺血患者 恢复灌注后，脑组织功能恢复缓慢，甚至病情有所加重。这种缺血脑组织 恢复血流灌注后，缺血脑组织功能并未恢复，甚至损伤和功能障碍加重的 现象称为脑缺血再灌注(CIR)。因此促进血管再通是再灌注损伤中防治缺 血性脑血管疾病的重要环节。丁苯酞(NBP)是从芹菜籽中提取的生物有机 活性成分，大量实验研究证明丁苯酞对心脑血管系统均具有保护作用。丁 苯酞预处理(NBP Preconditioning)是指组织器官在发生缺血前，给予丁苯 酞药物预处理，从而调动机体内源性的保护机制以减轻随后缺血再灌注时 对组织的损伤。近年来研究表明丁苯酞缺血预处理能明显减少脑细胞凋 亡，促进神经元功能恢复，起到脑保护作用，但其作用机制尚不明确。本 实验研究通过制备局灶性脑缺血再灌注模型，观察丁苯酞预处理对脑缺血 再灌注后海马神经元的保护作用，并探讨其潜在的保护机制。 目的： 该实验通过应用丁苯酞(NBP)预处理大鼠，采用改良Zea Longa 线栓 法制备右侧大脑中动脉阻断(MCAO)局灶性脑缺血再灌注模型，比较各组 实验大鼠神经功能评分；计算各组海马梗塞体积；观察各组海马神经元形 态学及超微结构的变化；对5-HT 表达的影响，探讨丁苯酞预处理对脑缺 血再灌注损伤后的大鼠海马神经元保护的作用，进一步揭示丁苯酞预处理 的潜在保护机制。 方法： 将160 只健康雄性SD 大鼠随机分成5 组(n=32):假手术组(Sham 组)、 缺血再灌注组(IR 组)、NBP 低剂量预处理组(NBP Ⅰ组)、NBP 中剂量预 处理组(NBP Ⅱ组)、NBP 高剂量预处理组(NBPⅢ组)。丁苯酞预处理(NBP) 各组分别给予NBP 20mg ·kg-1、40mg ·kg-1、80mg ·kg-1，每日1 次，共 1 中 文 摘 要 1 周；Sham 组和IR 组给予等量生理盐水；末次给药后24h 手术。用改良 Zea Longa 线栓法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型，按Zea Longa 评分 标准于大鼠脑缺血2h 再灌注24h 对各组实验动物进行神经功能评分，符 合标准的大鼠纳入各实验组；2%氯化三苯基四氮唑(TTC)染色计算大脑梗 塞体积；HE 染色法观察海马神经元的组织病理学变化；透射电镜法观察 海马神经元的超微结构及病理变化；免疫组化法观察 5-羟色胺(5-HT)阳 性细胞的表达；Western Blotting 测定5-HT 蛋白的含量。使用 SPSS17.0  软件进行统计分析。所有数据均采用均数±标准差( x ±s)表示，多组间比 较用单因素方差分析，两两比较用LSD-t 检验，以P0.01 为有显著性差 异。 结果： 1、神经功能评分 假手术组无肢体瘫痪，缺血再灌注组出现左侧肢体偏瘫，提尾悬空时 左侧屈曲、内收，自主活动时向左侧倾倒。以左后肢为圆心向对侧旋转。 NBP 预处理低、中、高三个剂量组神经功能评分显著低于缺血再灌注组， 有显著差异性(P0.0 1, P0.05)。NBP 预处理组中、高两个剂量之间相比 无统计学差异(P0.05)。 2 、TTC显示各组脑梗死体积百分比测定 假手术组右侧脑组织均匀红染，海马区未见梗死灶；缺血再灌注组可 见苍白色梗死灶。经梗塞体积计算NBP低、中、高剂量组较缺血再灌注组 减少，有显著性差异(P0.01, P0.05)，NBP 中剂量组与NBP高剂量组之 间相比无统计学差异(P0.05)。 3、光镜下海马区病理学变化 假手术组海马锥体细胞层次清晰，排列整齐，形成完整的细胞带结构。 细胞形态正常，边界清楚，核大而圆，核膜、核仁清晰可见。缺血再灌注 组锥体细胞