基于交流阻抗技术构建的生物传感器论文.pdfVIP

第九届全国电分析化学学术会议论文摘要集 B传统电分析化学(含机理研究) B02／基于交流阻抗技术构建的生物传感器 何品刚 徐颖 杨琳 叶晓燕 方禹之 (华东师范大学化学系，上海200062) 随着对基因结构和功能研究的不断深入，人类基因组计划(HGP)Ir顷禾I]完成， 人类进入了后基因组时代，生命科学从确定核酸(DNA，RNA)序列层次深入到 功能基因组研究和蛋白质组学研究上来ilj。人们发现许多疾病的产生都是因为 遗传信息(基因)发生了变化，产生出不正常的蛋白质。所以，DNA生物传 感技术和蛋白质生物传感技术是国内外生物分析工作者的研究重点和热点，在 疾病诊断、食品安全、环境监测、法医鉴定等领域意义重大12】。而交流阻抗技 术是用于研究电极反应过程的有效工具，可以提供有关电极界面性质的大量信 息，包括电子传递电阻，双电层电容等[31。应用这一技术构建的电化学DNA 生物传感器，可以直接通过检测杂交前后电极界面的电化学性质的变化作为杂 交信号，具有高灵敏、快速、无需标记等优点。使用交流阻抗法直接在电极表 面识别特定蛋白质更具深远意义，因为多数蛋白质在电极表面是没有电化学活 性，所以通常蛋白质的检测需要使用较复杂的荧光检测等较昂贵技术。 我们开展了将交流阻抗技术应用到电化学DNA杂交传感器和蛋白质传感 器的初步研究，主要目标是研制具有高灵敏度高选择性的新型电化学生物传感 器，应用于对特定DNA片断或特定标志性蛋白质的选择性测定，为基因和蛋 白质的快速和可靠分析测定提供一种简便、快捷、廉价的检测装黄。 的界面电子转移电阻(＆。)的变化作为检测信号，在Nyquist图谱直接观察了电 极表面固定的单链DNA(ssDNA)与溶液中的互补链之间的杂交过程，由于 DNA的磷酸骨架是富负电荷结构，所以电极表面双链DNA(dsDNA)的形成 会增加电极对溶液中负电荷物质Fe(CN)6川4的排斥力，使电极表面电子传递电 阻(Re。)增大。我们对多种实验参数进行了考察和优化，发现ssDNA探针在 电极表面合适的稀疏度有利于杂交反应的进行。在优化后的条件下，我们实现 了较高选择性和较高灵敏度的无标记型的DNA电化学传感器，检测下限为 3．0×10。14 mol L～：和完全互补序列相比，一个和三个碱基错配序列分别产生 55．6％币tl 1．3％的杂交信掣4|。此外，我们分别尝试了两种扩增方法用于提高传 感器的检测灵敏度。首先将半导体性质的CdS纳米颗粒标记到目标ssDNA链 上，明显增加杂交后金电极的心。数值，实现杂交信号的放大，使检测下限提 高2个数量级”J。最近我们将发卡ssDNA探针自组装到金电极表面形成杂交识 别层，通过正电荷物质选择性嵌入dsDNA对电极表面的dsDNA进行电荷补偿， 明显减小电极心。数值，由于其减小量大于杂交引起的增量，实现了杂交信号 43 第九届全国电分析化学学术会议论文摘要集 B传统电分析化学!盒塑壅塑窒! 的放大【6】。 为对阴离子，在吡咯电化学聚合过程中掺杂进聚合物膜(PPy)中，然后通过 观察ssDNA．PPy修饰电极在杂交前后的电极阻抗值变化作为DNA杂交信号， 构建了非标记型DNA电化学传感器【_7J；接着我们将PPy膜中杂化后的dsDNA 进一步金属化，转化为M．DNA，其电极阻抗的变化将更加明显，检测下限为 mol 5．O×10‘11 L～，提高了3个数量级【8J。 在电化学蛋白质传感器方面，最近我们将交流阻抗技术和新型的aptamer 识别技术相结合pJ，克服传统基于抗体识别蛋白质的限制。由于蛋白质为电子 传递的不良导体，同时多数蛋白质为带负电荷的非电解质大分子，所以当它被 电极表面固定的aptamer特异性捕获后，会在电极表面形成一层电子“绝缘层”， 谱观察电极民。的变化情况就可以快速识别目标蛋白。 参考文献 2001，121，1221 [1】S．Fields，Science 5，R 2004，11； [2】(a)K．Kerman，M．Kobay