基于交流阻抗技术和DNA适体构建的蛋白质传感器的研究论文.pdfVIP

第九届全国电分析化学学术会议论文摘要集 C电化学生塑堡壁堂皇皇塑坌堑丝兰 G32基于交流阻抗技术和DNA适体构建的 蛋白质传感器的研究 杨琳徐颖叶晓燕何品刚方禹之 (华东师范大学化学系，上海200062) 由于电化学交流阻抗技术可以提供电极与溶液界面的许多电化学特性，例如 电极阻抗(Z)、双电层电容(Cdl)、电极表面电子传递电阻(＆t)等，因此利用电化 学交流阻抗的方法研究蛋白质在电极表面的特异性吸附有其独特的优越性。其中 最重要的～个优点是用电化学交流阻抗技术研究蛋白质时，并不需要蛋白质必须 具有电化学活性，而恰恰许多蛋白质是没有电化学活性的。这为研究新型的电化 学蛋白质生物传感器或芯片提供了可能【1J。通过SELEX技术筛选得到的特定核酸 适体(Aptamer)分子具有类似抗体一样的性质，对特定的蛋白质具有高亲和力和 特异性， 因此能特异性识别蛋白质分子。核酸适体分子通常比抗体的分子量小、 结构简单、有很好的稳定性、不易失活、能保证合成的精确性及修饰的简易性【2J。 故核酸适体分子是一种理想的蛋白质识别分子，能很好的应用于蛋白质传感器中。 本文结合核酸适体和电化学交流阻抗技术，在金电极表面自组装上能特异性 DNA序列分子，然后通过Aptamer特异 识别凝血酶蛋白(thrombin)的Aptamer 叠，从而进一步放大在电极表面由thrombin引起的电化学阻抗值的变化。文中以 (Re。)的变化作为检测信号，获得到高灵敏度、高选择性的凝血酶蛋白电化学交 流阻抗谱。构建了一种具有特异性的高灵敏电化学交流阻抗蛋白质传感器。 实验过程 5．0x10吨M 在干净的金电极表面滴上59L Aptamer溶液，室温下静置20h， 1．0×lO。3M巯基己醇，静置2h。用缓冲液清洗10min， 用缓冲液冲洗，随后滴上59L thrombin溶液，静置20min。用缓冲液清洗后，在电极表面滴 在电极表面滴上59L 6M盐酸胍溶液，室温下作用90min。 上59L 本文利用CHI工作站扫描aptamer修饰金电极表面在特异性捕获目标蛋白质 前后的Nyquist图谱的变化，以测量出的k增量作为蛋白质识别信号。 结果与讨论 1．金电极表面电子传递电阻变化情况当Aptamer通过Au．S键自组装到电极 表面后，其带负电荷的磷酸骨架会排斥溶液中相同电性的[Fe(CN)61川4-，阻碍 [Fe(CN)6]3‘坞‘在金电极表面的电子交换，从而导致＆。阻值比裸电极明显增大，反映 后，由于蛋白质差的导电性pJ，进一步减慢了溶液中[Fe(CN)6】3搏在电极表面的电 子交换速度，使Nyquist图谱中的半圆直径进一步增大(如图1c)。当我们用盐酸胍 电极表面覆盖的thrombin层的表面积增大，引起R默的进一步增大(如图1d)。从对 性作用后，[Fe(CN)6]3／4-在金电极表面的氧化还原可逆性变差，峰电流减小；用盐 酸胍使thrombin变性后，峰形进一步变差，峰电流进一步减小。 第九届全国电分析化学学术会议论文摘要集 c电化学生物传蹙墅墨皇塑坌堑丝堂 采用了牛血清白蛋白(BSA)和一般序列的SH—DNA进行类比实验，结果表明： thrombin具有特异性的识别能力。 3．灵敏度与检测限我们考察了Aptamer对thrombin的特异性识别的灵敏度， 5范围内呈 thrombin溶液浓度的增加，所得＆t相应增大，在1．0×10‘14M到1．0x10。1 浓度／xlO舶M)，R2=0．983。 暑 号 一 图1．金电极的Nyquist图变化过程 圈2．金电极的循环伏安图变化过程 结论 本文基于交流阻抗技术和DNA适体分子对蛋白质分子的特异性结合研制了一 种新型的，具有特异性的，高灵敏电化学交流阻抗蛋白质传感器。该传感器对 thrombin具有很好的灵敏度和选择性，可