酶联免疫法选编.ppt

在酶联免疫分析技术中，由于酶标复合物常通过细胞膜进入细胞内与靶分子结合，因此所用的标记应选择相对分子质量低而酶活性高的酶类。 * * * 2、化学发光分析 化学发光分析是根据化学反应产生的光辐射确定物质含量的一种痕量分析方法。 化学发光免疫分析（CLIA）是将化学发光反应与免疫反应相结合而对抗体、抗原或半抗原进行测定的一种免疫分析方法。 第三节 发光酶联免疫分析 3、化学发光剂 用作标记的化学发光剂应符合以下条件： ①能参与化学发光反应； ②与抗原或抗体偶联后能形成稳定结合物； ③偶联后仍保留高的量子产率和反应动力； ④不改变或极少改变被标记物的物理化学特性，特别是免疫活性。 常用的化学发光剂有吖啶酯类化合物、氨基苯二酰肼类化合物、咪唑类化合物、苯酚类化合物、芳基草酸酯类化合物等。 第三节 发光酶联免疫分析 （1）吖啶酯类化合物 吖啶酯是三环有机化合物，很容易氧化。 当其在碱性介质中氧化时，经历共价键的断裂，产生二氧酮的中间体，然后形成电激发的N-甲基吖啶酮。当它回复到基态时在430nm处释放出光子。 在加入H2O2及随后加入NaOH调节至所需pH之前维持一低pH以实现最佳氧化过程，可加速其氧化反应。 吖啶酯氧化反应如图7-12所示。 第三节 发光酶联免疫分析 图7-12 吖啶酯氧化反应