pACTERT-TRAIL对涎腺腺样囊性癌SACC-83－副本.pdfVIP

pACTERT-TRAIL 对涎腺腺样囊性癌 SACC-83 增殖与调亡的影响1 12 12 12 12 苏涛 ，孙宏晨 ，苗雷英 ，臧光祥 1吉林大学口腔医学院（130041） 2 口腔生物医学工程吉林省重点实验室（130041） E-mail ：hcsun@ 摘 要：目的：研究真核表达质粒载体pACCMV-TRAIL 和 pACTERT-TRAIL 对体外涎腺 腺样囊性癌的增殖与调亡的影响。方法：以pACCMV-TRAIL 和pACTERT-TRAIL 分别转染 SACC-83 细胞和HEL 细胞，采用RT-PCR 和 MTT 方法及流式细胞仪检测 TRAIL 基因的 mRNA 表达、增殖能力和调亡水平。结果：hTERT 启动子可以调控TRAIL 基因仅在端粒酶 阳性的SACC-83 细胞中特异表达，并抑制肿瘤细胞的增殖和诱导凋亡。而CMV 启动子由 于缺乏靶向性，使得外源TRAIL 基因对 SACC-83 细胞和HEL 细胞均产生细胞杀伤作用。 结论：hTERT 启动子体外可以诱导TRAIL 基因靶向性调控涎腺腺样囊性癌的增殖与凋亡。 实验结果证明了方法的有效性。 关键词：hTERT 腺样囊性癌 涎腺肿瘤 基因治疗 1．引言 转基因治疗是将基因直接导入人体并在靶细胞中表达用于治疗和预防疾病的技术，但基 因治疗存在最突出的问题是非特异性问题，即基因传递系统非特异地影响正常细胞，引起一 定的毒副作用。这种不加选择的转染限制了基因对于恶性肿瘤的治疗，因此寻找无毒副作用 而且又具有靶向性的载体是基因治疗研究中的新目标。端粒酶是一种核糖核蛋白酶，能够将 端粒重复序列添加到染色体末端，它由自身的 RNA 模板及数个相关蛋白构成，其中最主要 的是其催化亚单位人端粒酶逆转录酶（human telomerase reverse transcriptase, hTERT ），研 究表明，涎腺腺样囊性癌高表达端粒酶，但在大多数正常体细胞中无活性，因此推测以端粒 酶为靶点可能用于涎腺腺样囊性癌的治疗。为此，我们利用含 hTERT 启动子的质粒载体， 通过转染涎腺腺样囊性癌 SACC-83 细胞和人红白血病细胞株 HEL 细胞，观察促凋亡基因 TRAIL 基因表达及对细胞增殖与凋亡能力的影响，为临床开展高效、定向和无创的涎腺肿 瘤基因治疗提供依据。 2．材料与方法 2.1 实验材料与仪器 腺样囊性癌细胞株(SACC-83 细胞) 由北京大学口腔医学院李盛林教授馈赠；正常人胚肺 成纤维细胞（HEL 细胞）由吉林大学第一临床医学院中心实验室提供；大肠杆菌 DH5 α由 解放军军需大学兽医系提供。真核表达质粒载体 pACCMV-TRAIL 和 pACTERT-TRAIL 由 美国 NIDCR 郑长玉博士馈赠。CO2 恒温细胞培养箱(美国), 超净工作台(杭州) ，倒置显微镜 （Olympus ），TGA-16G-A 低温高速离心机 （上海），紫外分光光度仪 （日本），Coulter 1本课题得到高等学校博士学科点专项科研基金（项目编号：20030183068 ）资助 - 1 - 流式细胞仪（美国），Bio-Rad 酶标仪（美国），Hind Ⅲ、EcoR I 等限制性内切酶、AMV 逆转录酶，Taq 酶、RNase 、DNA Marker (DL-2000 ,DL15000) 、Trizol 试剂 （TaKaRa 公司）， 质粒快速提取试剂盒（北京鼎国生物技术有限公司），Wizard 质粒 DNA 提取纯化试剂盒 （Promega ）,脂质体 Lipofectin® Reagent (Invitrogen) ， MTT 检测试剂（Gibco ）。 2 ．2 实验方法 2．2．1pACCMV-TRAIL和p