染色体步移技术研究进展教案.pdfVIP

生物技术通报 ·技术与方法 · B IO TECHN OLO G Y　BULL E T IN 2009年第 10 期 染色体步移技术研究进展 梁成真 张锐 郭三堆 (中国农业科学院生物技术研究所 国家农作物基因资源与基因改良重大科学工程 ,北京 100081) 　　摘 　要 : 　染色体步移技术是一种常用的克隆已知片段旁侧序列的技术 。综述了近年来染色体步移技术的发展情况 ,介 绍了结合基因组文库的染色体步移技术和基于 PCR 的染色体步移技术 。同时总结了物理剪切法和限制性内切酶法构建亚克 隆文库的优化步骤 , 以及连接成环 PCR 法 、外源接头介导 PCR 法和半随机引物 PCR 法的原理 ,并且比较分析了他们之间的优 缺点 , 以期对实际操作起到借鉴作用 。 关键词 : 　染色体步移 侧翼序列 　BAC克隆 反向 PCR 外源接头介导 PCR 半随机引物 PCR Progress of Chrom osom e W a lk ing L iang Chengzhen Zhang Ru i Guo Sandu i (B iotechnology R esea rch Institu te, Ch inese A cadem y of A g ricu ltu ra l S ciences, N a tiona l Key ) F acility f or Crop Gene R esou rces and Genetic Imp rovem en t, B eij ing 100081 　　Ab s tra c t: 　Chromo som e walk ing techn ique s are common ly u sed for clon ing the known flank ing sequence. In th is review , chromo som e walk ing techno logie s are introduced in th is years, included genom ic library techn ique s for chromo som e walk ing technology and the PCR amp lification techn iques for chromo som e walk ing. A t the sam e tim e, we e stab lish the con struction system of BAC shotgun lib rary, a s well a s the p rincip le s of orb icu larligation PCR , adap term ediated PCR and sem irandom p rim er PCR. A fter analyzing the advantage s and disadvan tage s of these different strategies or techn ique s in the sam e strategie s, we discu ssed the app lication field and developm en t p ro sp ect of corre sponded techn ique s. Key w o rd s: 　Chromo som e walking Flanking sequen