大鼠脑微血管内皮细胞的纯化培养和鉴定.pdf

·535· 生围堕查鱼!瘟盘查!Q!!生!Q旦!!旦箜!鲞筮!Q翅垦!迪』￡!堡!竺!!竺望bQ些!!：!Q!!：坠!!：丛生!Q 基础研究· 大鼠脑微血管内皮细胞的纯化培养与鉴定 鹿文葆秦伟伟 刘淑英李宏伟修瑞娟 摘要：目的探讨获取纯度较高的原代大鼠脑微血管内皮细胞(BMEcs)的分离和培养方法。 方法选取10只3周龄wistar大鼠，取大脑，去除白质，剪碎成大约1mm3大小，通过两次酶消化、 20％BsA离心和33％连续密度Percoll梯度离心，获得纯度较高的大脑微If『L管片段，接种于涂布明 胶的35mm dish培养皿中，加入含4斗g／ml嘌呤霉素的内皮细胞培养基，2d后更换新鲜培养基；采用 倒置显微镜观察内皮细胞生长状况及其形态；免疫组化法检测BMECs标志物Ⅷ因子相关抗原 (vwF)的表达，以及神经胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)的表达情况。结果培养24h后可见内皮 细胞从贴壁的腩微血管片段周围长出，细胞呈梭形；5～6d可形成融合；融合后的BMEcs呈典型的 “鹅卵石”样外)I!ll；免疫组化法检测显示BMEcs的vwF表达阳性，GFAP表达阴性，内皮细胞纯度 (vwF阳性细胞表达率)达96％以j：。结论该方法能够成功获得纯度较高的原代大鼠BMEcs。 关键词： 内皮细胞；脑微血管；细胞，培养的；大鼠；体外研究 doi：10．3969／j．issn．1672-5921．2011．10．008 Puri6edcultureandidentincationof恤eratbrainmicrovasclllarendotheHalcellsLUI％n一6∞． Q删耽i一雠i，ⅡU鼬M一∥ng，Ⅱ舶愕一wi，则U尺Mi扣n．加m眦e矿胁crocircⅡZmiDn，胁疵抛矿觑拓 肘ed如oz un抽n胁出 sc曲，嬲旷吼i脚eAco如叼r矿^知d拓nzie聊部n利＆^∞f矿曰∞缸胁d如i艘0，n七ing 讹ZcoZZE酽，＆坑ng100005，铂i船 nz肛^or：ⅪU Con”已印o，ld打lg RⅡi扣凡，点’M以：茹iu巧@弘^oD．com．cn 7ro andobtaintheisolationandculturemethodsofthe Abstract：objectiVe explore highlypurified ratbrainmicrovascularendothelial Methods7rhebminsof103一week—old primary cells(BMECs)． Wistarratswereharvested thewhitematterand into bydecapitation，remo“ng mincingapproximately 1mm3．A brainmicrovascularwereobtained mice， highlypurified fragments throughenzymaticdigestion 20％bovinesemm 33％continuous were Percoll albumin(BSA)and densitygradientcentrifugation．They incubatedinto 35mmdish andtheendothelialmedium gelatin—coated plates containing4斗g／rIllpummycins