植物亚原生质体分离与融合研究进展.pdfVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００９，２９（９）：９７～１０１ 植物亚原生质体分离及融合研究进展  徐小勇 　孔　芬　王汝艳　陶　俊 （扬州大学园艺与植物保护学院　扬州　２２５００９） 摘要　植物亚原生质体中的胞质体和微原生质体在植物遗传改良等应用方面上具有重要意义， 就国内外在胞质体和微原生质体分离和融合等方面的研究进行了综述，同时对研究中存在的问 题提出了展望。 关键词　亚原生质体　胞质体　微原生质体　融合 中图分类号　Ｑ９４２ 　　自从英国Ｃｏｃｋｉｎｇ教授首次采用酶解法获得原生质 茄、伊乐藻、烟草、天仙子和洋葱等植物的原生质体中 体以来，植物原生质体培养及融合已取得了显著的进 可发现自发产生的胞质体［７］，但自发产生的频率较低， ［１，２］ 且仅存在于个别作物中，没有广泛的应用价值。目前 展 ，部分物种的原生质体操作已经程序化，如烟草、马 铃薯、柑橘等，同时有大量潜在育种价值的体细胞杂种植 制备大量胞质体的方法主要有质壁分离和离心两种。 株获得。目前，体细胞杂种大多数是通过对称融合和非 １．１．１　质壁分离方法　不少研究者发现当长柱形细 ［７，８］ 对称融合获得的，这两种方式再生的体细胞杂种大部分 胞发生质壁分离时，会分解形成两到三部分 ，在一 并不能如预期所想，再生的体细胞杂种主要是对称杂种、 个细胞里面，一部分包括核，其他部分则是胞质体，继 非对称杂种以及少数胞质杂种。其融合结果的不可预料 而采用纤维素酶和果胶酶处理去除细胞壁，胞质体会 ［８］ 性和随机性不利于新种质的创造和品种改良，在一定程 释放到等渗的稳定溶液中，此时可使用微吸管收集 。 ［７］ 度上限制原生质体融合的应用。亚原生质体融合可为定 此外，Ａｒｃｈｅｒ等 结合Ｐｅｒｃｏｌｌ梯度低速离心，分离到最 向遗传改良提供一种新的途径。植物亚原生质体主要有 高纯度为 ［８］ ６３％的烟草胞质体。Ｂｒａｄｌｅｙ 对该现象作出 三种：核质体（ｍｉｎｉｐｒｏｔｏｐｌａｓｔ，含有少量细胞质和完整细 解释，认为质壁分离形成胞质体的前提是制备原生质 胞核的原生质体）；胞质体（ｃｙｔｏｐｌａｓｔ，去核后的原生质 体的材料是长柱形细胞，并且细胞的长度是其直径的π 体）和微原生质体（ｍｉｃｒｏｐｒｏｔｏｐｌａｓｔ，含有一条或几条染色 ［９］ 倍以上。但Ｖａｔｓｙａ等 认为 Ｂｒａｄｌｅｙ的理论只适用于 体的原生质体）。其中胞质体和微原生质体应用较多，本 长柱形细胞，而对少数其他类型细胞在质壁分离过程 文就该方面的研究做一综述。 中也形成了胞质体的现象是不能解释的。同时，他也 给出一个通用的解释，在高渗透压溶液中的细胞，细胞 １　植物胞质体分离及融合 壁在与细胞膜分开过程中，体积下降速度比表面积要 ［３］ 快，当体积下降速度与表面积下降速度之比大于