第9章酶的催化特性及反应动力学.ppt

第9章 酶的催化特性及反应动力学 ◆ 一、酶的催化特性 ◆ 二、影响酶促反应速度的因素 底物浓度，酶浓度，温度，pH，抑制剂和激活剂对酶反应速率的影响 ◆ 三、酶的反应动力学 1. 酶催化作用条件温和 （一）邻近效应与定向效应变分子间反应为分子内反应 邻近效应：酶与底物形成中间复合物后使底物之间、酶的催化基团与底物之间相互靠近，提高了反应基团的有效浓度。 定向效应：由于酶的构象作用，底物的反应基团之间、酶与底物的反应基团之间正确取向的效应 酶把底物分子从溶液中富集出来，使它们固定在活性中心附近，反应基团相互邻近，同时使反应基团的分子轨道以正确方位相互交叠，反应易于发生。 酶高效催化的机制是什么？ 2、底物形变和诱导契合的催化效应 酶中某些基团可使底物分子的敏感键中某些基团的电子云密度变化，产生电子张力，降低了底物的活化能。 （二）底物的形变和诱导契合 产物脱离 3.张力和形变： 酶活性中心提供H+/H+受体使敏感键断裂的机制。 4.酸碱催化作用——多元催化 2.共价催化作用 1、需要金属离子的酶 （1） 金属酶 (metalloenzyme) 含紧密结合的金属离子 Fe2+、Cu2+、Zn2+、Mn2+、Co3+ ， （2）金属激活酶( metal-activited enzyme) 含松散结合的金属离子 Na+、K+、Mg2+、Ca2+ 2、金属离子的作用 A、参与底物反应的定向 B、通过价态改变参与电子转移 C、通过静电稳定/屏蔽负电荷 —指酶对底物的选择性，也称特异性。 （1）锁钥学说——刚性构象 （2）诱导契合学说 （3）过渡态互补学说 ——静电效应、极性相同 锁钥假说： 确定酶专一性的步骤 1）选择适当底物，确定该酶促反应的最适温度，pH等条件 2）试验该底物浓度对酶促反应速度的影响，确定Km和最大反应速度Vmax 3）选择一系列底物类似化合物，在相同条件或不同条件依次试验该酶对系列化合物的催化情况，确定该酶属于绝对专一还是相对专一 4）对于相对专一性酶，确定最适底物 5）对于手性化合物，确定是否具有立体专一性 （1）酶浓度的可调性 （2）通过激素调节酶活性 （3）反馈抑制调节酶活性 （4）抑制剂和激活剂 （5）别构调控、共价修饰、同工酶等 如右图所示： 在底物浓度低时, 反应速 度与底物浓度成正比。当底 物浓度达到一定值，几乎所 有的酶都与底物结合后，反 应速度达到最大值（Vmax） ，此时再增加底物浓度，反 应速度不再增加。 米氏方程的推导：P223 米氏常数的物理意义是什么？ 米氏常数Km的测定： 2.酶浓度 3.温度 酶的最适温度: 酶促反应速度最大时 的温度。 温度对酶的影响表现在？ 影响酶的稳定程度，影响酶蛋白的热变性 影响酶的最大反应速度 影响酶和抑制剂，激活剂或辅酶的结合 影响酶和底物分子中某些解离基团的解离常数 影响反应缓冲液的pH或某些气体的溶解度 pH对酶活性的影响表现在？ 环境过酸或过碱会影响酶的构象，使酶失活 影响酶活性部位催化基团的解离，使底物不能分解为产物 影响酶活性部位结合基团的解离，使其不和底物结合 影响底物的解离状态，使底物不能和酶结合，或结合后不产生产物 激活剂(A):凡是能提高酶活性的物质。 （二）激活剂的类型 1.无机离子 如：Na+、K+、Ca2+、Mg2+、Cu2+、Zn2+、Co2+、Cr2+、Fe2+、Cl-、Br-、I-、CN-、NO3-、PO4-等； 2.有机小分子 如：EDTA 抗坏血酸、半胱氨酸、谷胱甘肽 3.生物大分子 如：酶原激活时的蛋白酶 这些离子可与酶分子上的氨基酸侧链基团结合，可能是酶活性部位的组成部分，也可能作为辅酶或辅基的一个组成部分起作用； 一般情况下，一种激活剂对某种酶是激活剂，而对另一种酶则起抑制作用； 对于同一种酶，不同激活剂浓度会产生不同的作用。 ６.抑制剂（inhibitor) 1.不可逆抑制： 2.可逆抑制： I以非共价键与酶结合而引起酶活力降低。可以通过物理方法解除。 （1）竞争性抑制：最常见。 ① I与底物竞争酶的活性中心而而抑制酶活性 （3）反竞争性抑制： ① I与酶和底物的中间复合物结合而抑制酶 活性。 一、酶反应动力学 ◇ （一）反应速率及其测定 ◇ （二）反应分子数和反应级数 ◇ （三）各级反应的特征 （一）反应速率及其测定 反应速率是以单位时间内反应物或生成物浓度的改变来表示。随着反应的进行，反应物逐渐消耗，分子碰撞的机会也逐渐渐小，因此反应速率也随着减慢（图9-1））因为每一瞬间的反应速率都不相同，所以用瞬时速率表示