第四章二维电泳与细胞蛋白质的分离.pptVIP

第四章 二维电泳与细胞蛋白质的分离 V:泳动速度cm/秒or分 d:泳动距离cm t:电泳时间 (秒/分) E:电场强度 伏特/cm 聚丙烯酰胺凝胶电泳原理 凝胶浓度(T)的选择与被分离物质分子量密切相关 电泳过程示意图 A为电泳前3层凝胶排列顺序，3层胶中均有快离子，慢离子 B显示电泳开始后，蛋白质样品夹在快、慢离子之间被浓缩成极窄的区带 C显示蛋白质样品分离成数个区带 不连续系统浓缩效应示意图 1D-SDS分离局限性 分离度相当有限 显示含有单一蛋白质的条带实际可能含有多种蛋白质分子 一个纯化的蛋白质可能含有多种蛋白质形式 1D-SDS分析看上去纯净的单一条带，相同样品的2D-SDS可将相同分子质量条带分解成具有不同等电点的多点 反应了蛋白质的翻译后修饰，化学修饰几乎不影响SDS结合或在PAGE上的迁移 二维电泳技术 Smithies和Poulik（1956年）最早引入二维电泳技术：将纸电泳和淀粉凝胶电泳结合分离血清蛋白质 O’Farrell发明的二维电泳体系 根据蛋白质的两个一级属性：等电点和相对分子质量的特异性将蛋白质混合物在第一个方向上按照等电点高低进行分离（等电聚焦），在第二个方向上按照相对分子质量大小进行分离（SDS） 二维电泳技术 二维电泳分离后的蛋白质经显色方法（考马斯亮蓝染色、酸性银染、碱性银染、负性染色、荧光染色、放射性标记）处理后，通过图