柠檬酸产生菌.ppt

微生物发酵工程部分 Ⅰ 柠檬酸产生菌的分离、发酵、分 析、提取及检测（好氧发酵部分） Ⅱ 酒精及酒类方面的综合实验 （厌氧发酵部分） 生物技术专业系统实验二（微生物发酵工程部分） 云南大学生命科学学院 生物技术系 张理珉 微生物发酵工程 实验一 柠檬酸产生菌的分离及初筛 实验二 柠檬酸产生菌的复筛 实验三 应用正交实验法优选柠檬酸产生菌 的最佳发酵培养基 实验四 柠檬酸产生菌的发酵 实验五 柠檬酸的提取 实验六 柠檬酸发酵产物及提取产品的检 测、鉴定 微生物发酵工程是一门利用微生物科学和工程学的原理去研究微生物在生物反应器中工艺特点和生长规律的学科。主要研究微生物细胞中复杂的生物化学反应，控制生物合成或降解、大规模地生产预期的产物，达到特殊的目的。其应用范围广泛，包括医药、食品、粮食、饲料、农业、林业、化工、化纤、冶金、能源、环保等方面。 微生物发酵工程实验是在学习了有机化学、微生物学相关知识、微生物发酵工程中的工艺设备后，并具备一定的实验动手能力基础上，通过微生物发酵工程实验课程的教学，使学生了解并掌握微生物发酵工程中所涉及的发酵工艺、设备、分析等几方面的知识及实验技能。 Ⅰ 柠檬酸产生菌的分离、发酵、分析、提取及检测（好氧发酵部分） 柠檬酸生产介绍 柠檬酸又名枸橼酸，它是存在于柠檬等水果中的一种有机酸。学名为3-羟基3-羧基戊二酸。 柠檬酸具有令人愉快的酸味，它入口爽快，无后酸味，安全无毒，是发酵法生产的最重要有机酸。它在水中的溶解度极高，能被生物体直接吸收代谢。它的许多特殊优点使它在各个工业部门得到了广泛的应用。柠檬酸的盐类和衍生物也各具优点，用途广泛，在国民经济中占有重要地位。 本实验通以柠檬酸产生菌黑曲霉为代表，学习工业微生物的分离、初筛、复筛、正交实验、发酵罐发酵、产物提取及鉴定等实验，使学生较全面系统地掌握微生物发酵工程的基本实验方法和技能。 实验的总体路线 土壤 稀释分离 变色圈平板 挑菌 纯化 摇瓶初筛 产物鉴定 复筛 正交实验 重复实验 发酵罐发酵 产物提取 产品鉴定 实验一 柠檬酸产生菌的分离及初筛 实验目的： 1、了解黑曲霉菌在工业生产中的不同作用； 2、复习掌握从土壤中分离工业用微生物的原理 及方法； 3、掌握利用变色圈法筛选产酸菌的方法。 实验目的： 1、了解黑曲霉菌在工业生产中的不同作用； 2、复习掌握从土壤中分离工业用微生物的原理及方法； 3、掌握利用变色圈法筛选产酸菌的方法。 实验原理： 1、新菌株的分离大致可分为采样、增殖（富集）培养，分离鉴定、性能测定等步骤。 2、柠檬酸可由曲霉菌发酵糖类而生成，其中尤以黑曲霉产酸能力最强。目前工业生产中多以黑曲霉为柠檬酸产生菌。 3、黑曲霉耐酸性较强，在pH值1.6时仍能良好生长。利用其产酸高、耐酸强的生理特征，使用pH1.6的酸性营养滤纸分离该菌，简单易行，再加上用变色圈法进行初筛，使产柠檬酸的菌株更易被选出。 4、黑曲霉产生的柠檬酸,可利用Deniges氏液鉴别；其产酸量可用0.1N氢氧化钠滴定。 柠檬酸产生菌的分离实验步骤: 1、土壤采样 2、准备稀释分离用的器材 3、将平皿、吸管包好后干热灭菌 4、配制察氏培养基 5、做成固体斜面 6、配成蓝色的察氏-多民培养基 7、湿热灭菌 8、摆斜面、倒平板 9、稀释土样 10、涂布均匀 11、倒置培养。 变色圈反应 柠檬酸产生菌的初筛实验步骤: 1、配制初筛发酵培养基并灭菌 2、观察菌落 3、挑选菌落变色圈，测量变色圈与菌落直径之比，取比值较大者 4、将选好的菌株编号，接入斜面。同时采用倒置接种法在培养皿上点植接种 5、培养斜面和平皿 6、摇瓶发酵 7、柠檬酸鉴定 8、产酸量的测定。 思考题 1.简述从土壤中筛选产目的产物微生物菌种的过程。 2.土壤采样时应注意的哪些问题？ 3.黑曲霉柠檬酸产生菌菌株的富集应考虑利用哪些特点来进行富集？ 实验二 柠檬酸产生菌的复筛 实验目的： 1.掌握以初筛的菌株为基础进行选优的复筛方法； 2.掌握摇瓶发酵的方法。 实验原理： 初筛选出的菌株必须进行摇瓶发酵复筛，复筛不是初筛简单的重复。 复筛的主要目的： ①考查菌株生产能力的自然波动范围； ②复筛的菌种经过斜面传代，在摇瓶复筛中考查菌种的传代稳定性； ③选出稳定、高