仪器分析选论16.5.2酶免疫分析技术剖析.pptx

;2;一、均相酶免疫测定法;一、均相酶免疫测定法;二、非均相酶免疫测定法;酶联免疫吸附试验（ELISA）;方法类型及反应原理;;（1）将已知抗体包被于固相反应板上，洗涤。 （2）加待检标本,温育，洗涤。 （3）加酶标抗体，洗涤。 （4）加底物，根据颜色反应的程度进行该抗原的 定性或定量。 ;;2.双位点一步法检测抗原;; ; 如果待检标本中抗原浓度过高， 容易形成“钩状效应（hook effect）”。钩状效应严重时，可出现假阴性结果，必要时可将待检标本适当稀释后重新测定。;3.竞争法检测抗原;酶标抗原;（1）将特异性抗体包被于固相反应板上，洗涤。 （2）待测管中加待检标本和一定量酶标抗原的混合溶液，待检标本中如果含有抗原，则与酶标抗原竞争固结合相抗体，使酶标抗原与固相载体的结合量减少。对照管中只加酶标抗原，温育，洗涤。 （3）加底物显色。对照管中颜色深，待测管颜色越淡，表示标本中抗原含量越多。; ;（二）检测抗体的方法; ; ;2.双抗原夹心法;;4.加酶作用的底物 不显色;3.竞争法检测抗体;（1）竞争法检测HBcAb： ①将HBcAg包被于固相反应板上，洗涤。 ②加入待检标本和酶标特异性抗体，温育，洗涤。 ③加入底物，温育，形成有色产物，用酶标比色仪测定结果。显色深浅与待检标本中相应抗体含量成反比。;;3.加酶作用的底物 显色;（2）竞争法检测HBeAb： ①将HBeAb包被于固相反应板上，洗涤。 ②加入待检标本和HBeAg，温育，洗涤。 ③加入酶标HBeAb，温育，洗涤。 ④加入底物，温育，形成有色产物，用酶标比色仪测定结果。显色深浅与待检标本中相应抗体含量成反比。;;;方法评价;1．病原体及其抗体测定 广泛应用于传染病的诊断。 2．蛋白质测定 各种免疫球蛋白、补体组分、肿瘤标志物各种血浆蛋白质、同工酶等。 3．药物和毒品测定 如地高辛、苯巴比妥、庆大霉素、吗啡等。;酶增强免疫测定技术EMIT; 当酶标半抗原与抗体结合后，抗体与所标记的酶密切接触，使酶的活性中心不受影响，其活性得以发挥，通过加底物测定反应系统中酶活性。待测半抗原含量与酶活性成正比，即待测半抗原越多，酶活性越高。通过建立标??曲线，可以求得样品中半抗原的含量。该技术主要用于检测小分子或半抗原，在药物检测中应用最多。;克隆酶供体免疫测定技术CEDIA; CEDIA反应模式为竞争法。测定原理为标本中的抗原与ED标记的抗原与特异性抗体竞争结合，形成两种抗原抗体复合物。ED标记的抗原与抗体结合后由于空间位阻，不能再与EA结合。反应平衡后，剩余的ED标记抗原与EA结合，形成具有活性的酶，加入底物测定酶活力。酶活力的大小与样品中抗原含量呈正比。CEDIA主要用于药物和小分子物质的测定。