小檗碱 计划.docVIP

动物实验方案（小檗碱） 1、概要 本实验采用灌胃方式给药，分别于小檗碱在大鼠体内的分布相后期、平衡相和消除相前期固定三个时间点摘眼球采血，解剖取大鼠的心、肝、脾、肺、肾、脑，冷藏待用。按给药浓度（高、低），小檗碱组（单）和小檗碱+甘草次酸组（合），小檗碱的分布相（F）、平衡相（P）和消除相（X），将实验分为13组如下表： 分布相（F） 平衡相（P） 消除相（X） 高浓度组 （G） 单（D） 合（H） 低浓度组 （D） 单（D） 合（H） 空白组 每组6只大鼠，雌雄各半，共需SD大鼠78只。 2、材料与试剂 2.1、实验动物：SD大鼠（每只200-300克）78只，雌雄各半。 2.2、试剂：小檗碱（Curcumin） 甘草次酸（GE） 羧甲基纤维素钠(CMC-Na) 草酸铵 草酸钾 蒸馏水 品红 2.3、仪器设备： 解剖剪 镊子 容量瓶 烧杯 玻棒 滴管 灌胃针 离心机 电子天平 解剖板 移液枪 离心管 冻存管 康宁管 手套 口罩 标签纸 培养皿 3、实验方法与步骤 3.1、实验前期准备 3.1.1、清洗实验器具：自来水冲洗 蒸馏水洗 适量有机溶剂清洗 烘干 3.1.2、贴标签： 离心管：用来采血和离心，一鼠一管，需78支。标签标为： 高浓度（单） 分布（1） Eg. 冻存管：用来装离心后的血液，一鼠一管，需78支。标签为： 小檗碱（高） XB-GF-D(1) Eg. 康宁管：用来装大鼠器官，一管装同组两鼠的同一器官，需234支。标签为： 小檗碱（高） XB-GF-D(1+2)心 Eg. 3.1.3、挖埋鼠坑 3.1.4、称量大鼠、作标记、分组、计算给药量 随机选6只大鼠，雌雄各半，用品红溶液分别标记6只大鼠的左前肢、右前肢、左后肢、右后肢、头部、尾部，分别记为序号1、2、3、4、5、6.将大鼠装入大的塑料杯中用电子天平称量鼠重记录于下表。将称得的大鼠放置同一鼠笼中，禁食12h，自由饮水。其余各组操作同上。 项目 序号 体重（g） 给药量（ml） 给药时间 采血时间 1 2 3 4 5 6 3.1.5、配制药品 配制250ml 0.5%CMC-Na：精密称取1.25gCMC-Na于适量蒸馏水中超声溶解，移入250ml容量瓶中，加蒸馏水定溶至250ml，混匀，放入冰箱中冷藏待用。 配制100ml抗凝剂：精密称取1.2g草酸铵和0.8g草酸钾，加入适量蒸馏水溶解，再移入100ml容量瓶中加蒸馏水定容至100ml，混匀，放入冰箱中冷藏待用。 配制小檗碱药液: 高浓度组：配50ml,浓度40mg/ml,精密称取2g小檗碱粉末溶于适量0.5%CMC-Na中，移至50ml容量瓶中，加0.5%CMC-Na定容至50ml，混匀，放入冰箱冷藏待用。 低浓度组：配50ml,浓度20mg/ml.精密称取1g小檗碱粉末溶于适量0.5%CMC-Na中，移至50ml容量瓶中，加0.5%CMC-Na定容至50ml，混匀，放入冰箱冷藏待用。 配制小檗碱-甘草次酸药液： 高浓度组：配50ml,小檗碱浓度40mg/ml.甘草次酸浓度5mg/ml。精密称量2g小檗碱粉末和0.25g甘草次酸粉末溶于适量0.5%CMC-Na中，移至50ml容量瓶中，加0.5%CMC-Na定容至50ml，混匀，放入冰箱冷藏待用。 低浓度组：配50ml,浓度20mg/ml.甘草次酸浓度5mg/ml。精密称量1g小檗碱粉末和0.25g甘草次酸粉末溶于适量0.5%CMC-Na中，移至50ml容量瓶中，加0.5%CMC-Na定容至50ml，混匀，放入冰箱冷藏待用。 配制0.9%生理盐水： 3.2、给药与采血及组织样本的制备 3.2.1、高浓度组： 取禁食12h后的SD大鼠36只（6组），每组6只，雌雄各半，以小檗碱计,每只大鼠按400mg/kg灌胃给药，其中3组灌胃小檗碱，另外3组灌胃小檗碱+甘草次酸，在鼠笼上贴上标签。灌胃后,按分布相、平衡相和消除相分别于1h、2h、4h后摘眼球取血。取血用的离心管中预先加入0.4ml抗凝剂，取好血后，将其放入离心机进行离心，以 3000r/min 离心10min。离心完后取上清液至冻存管中，放入冰箱中-20℃下保存。 取血后的大鼠颈椎脱臼处死，迅速取出肝、肾、心、肺、脾、脑等组织，用0.9%生理盐水洗净表面浮血，滤纸吸干，置-20℃ 冷冻保存。 注意，取器官时不要将大鼠消化道剪破。 3.2.2、低浓度组： 以小檗碱计,每只大鼠按200mg/kg灌胃给药，其余与高浓度组相同。 3.2.3、空白组: SD大鼠6只, 雌雄各半。给药前禁食12 h，自由饮水。以10ml/kg灌胃0.5%CMC-Na.灌胃1h后摘眼球取血。其余操作同高浓度组。 4、清洗实验器材和