附件3皮肤光变态反应试验方法（征求意见稿）及编制说明.docVIP

皮肤光变态反应试验 Skin Photoallergy Test 范围 本方法规定动物皮肤光变态反应试验的基本原则、要求与方法 本方法适用于化妆品原料和产品的皮肤光变态反应检测 规范性引用文件 GB 14924.3-2010 实验动物 配合饲料营养成分 GB 14925-2010/XG1-2011《实验动物 环境及设施》国家标准第1号修改单 光感作性。化粧品の安全性評価に関する指針2015日本化粧品工業連合会編2015年11月27日出版薬事日報社 试验的基本原则 6.1 光化学品安全性评价的一般原则 化妆品原料在紫外可见（UV/VIS）光谱（290-700 nm）有吸收， 具有光稳定性，以及根据SAR结果提示具有潜在的或不良的光效应。 如果某物质在290-700nm的摩尔消光系数不超过1000 L/mol. cm时，无需提供光过敏试验的相关数据。 6.2 实验动物颈部去毛皮肤通过多次皮肤涂抹诱导剂量的化妆品原料后（可提前给予佐剂、皮肤损伤处理以增强敏感性）且多次暴露于一定剂量的紫外线（日光）下，诱导特定免疫系统（诱导阶段），经过一定间歇期后，在动物背部去毛皮肤给予激发剂量的受试物后暴露于一定剂量的紫外线（日光）下，观察实验动物并与对照动物比较对激发接触受试物的皮肤反应强度。 6.3 实验动物与饲养环境 一般选用健康、成年雄性或雌性白色豚鼠，体重350~500g，雌性动物应选用未孕或未曾产仔的。 实验动物及实验环境设施应符合国家相应标准。选用豚鼠维持饲料，饮用无菌纯化水，注意以合适的方式补充适量Vc。 6.4 动物试验前准备 试验前动物要在实验环境中至少适应3d~5d。将动物随机分为受试物组、阴性（溶剂）对照组、阳性对照组，诱导接触开始24h前在动物颈部给动物备皮（去毛），避免损伤皮肤。试验开始和结束时应记录动物体重。 6.5 无论在诱导阶段或激发阶段均应对动物进行全面观察包括全身反应和局部反应，并作完整记录。 试验方法 根据日本《化妆品安全性评价指南》（2015）中“光变态反应试验”中的推荐，本试验方法选用Adjuvant and Strip (佐剂和角质剥离)法。以下动物试验方法以Adjuvant and Strip（佐剂加角质剥离法）为例。 7.1 动物与分组 动物分为受试物组，阳性对照组，阴性对照组；每组至少5只动物。如果试验目的包含获取受试物致敏强度值，并对受试物进行光变态强度的分级，则每组至少需要10只动物。 7.2 剂量水平 诱导接触阶段的受试物浓度为能引起皮肤轻度刺激反应的最高浓度，激发接触阶段的受试物浓度为不能引起皮肤刺激反应的最高浓度。试验浓度水平可以通过少量动物（2~3 只）的预试验获得。 受试物、阳性物、阴性对照的诱导与激发浓度选择：通过预试验，排除原发皮肤刺激性与光毒性后的合适的浓度。通常选取的阳性物在所选取的浓度下其致敏率应为轻度或中度。 7.3 阳性物 常用较强的阳性物为四氯代水杨酰苯胺（tetracholosalicylanilide,TCSA）或其它多卤代水杨酰苯胺（如三溴代水杨酰苯胺，3,5,4‘-Tribromosalicylanilide，TBS）。弱的阳性物可选择6-甲基香豆素、硫氯酚等。常用阳性物的溶剂为丙酮、乙醇或二者按一定比例的混合物。 每次试验均需设阳性对照物组。 7.4 增敏剂的配制 本试验以1：1(v//v)完全弗氏佐剂（FCA）UV 光源 7.5.1 光源选择 320nm~400nm 的UVA，如含有UVB，其剂量不得超过0.1J/cm2。 7.5.2照射剂量 诱导阶段与激发阶段照射剂量均设为10.2J/cm2。 7.5.3 强度的测定 用前需用辐射计量仪在实验动物肩部（诱导阶段）、背部（激发阶段）照射区设数个点测定光强度（mW/cm2），以平均值计。 7.5.4 照射时间的计算：以照射剂量为10.2J/cm2为例，按下式计算照射时间。 照射时间(min)= 照射剂量(1000mJ/cm2) 光强度[mJ/(cm2·s)]×60 1mW/cm2 = 1mJ/cm2/sec 7.6 试验步骤 7.6.1 备皮 正式试验前l8-24h将动物颈部皮肤去毛，去毛面积约为2×4 cm2，试验部位皮肤需完好，无损伤及异常。 7.6.2 光诱导阶段的处理 在动物颈部去毛区的四角分别皮内注射0.1ml FCA与生理盐水的1:1（v/v）混合乳剂(只注射一次)，然后在敷用区域以透明胶带粘附并揭开，反复数次以剥去部分表皮角质层，再将受试物（阳性对照组、阴性对照组则涂抹阳性物或阴性（溶剂）对照物）约0.1 ml(g)均匀开放涂抹在去毛区，30min后用UVA进行照射（照射剂量为10.2 J/cm2，UVB剂量剂量不得超过0.1J/cm2 (试验前用紫外辐照计在实验