液相蛋白质芯片检测血清C反应蛋白方法建立-临床检验杂.PDF

维普资讯 临床检验杂志2007年第25卷第 i期 ChineseJournalofClinicalLaboratoryScience，2007，VoI．25，No，I 7 文章编号：1001-764XI2007)01-0007-03 中图分类号：R392．33 文献标识码：A ’化、^—者t ‘ 液相蛋白质芯片检测血清 C反应蛋白方法的建立 袁洪，闾宏伟 ，桑海强 ，阳国平 ，黄志军，林玲 ，邢晓为 (中南大学湘雅三医院，长沙410013) 摘要：目的 建立液相蛋白质芯片检测血清c反应蛋白(CRP)的方法，探讨该方法诊断冠心痛的临床应用价值。方法 用聚 苯乙烯荧光微珠，将抗CRP单克隆抗体包被在微珠上，将另一针对CRP不同抗原表位的单克隆抗体生物素化；包被好的微珠 加入到96孔板中，将待测血清分别加入各孔，用CRP标准品建立标准曲线，各孔中加入生物素化抗 CRP单抗和PE荧光素标 记的链霉亲舍素。在Bio—Plex液相蛋白质芯片分析仪上检测296份血清样品。同一血清标本同时用免疫比浊法测定。比较 两种方法对 CRP检测的敏感性和特异性。结果 液相蛋 白质芯片检测 CRP方法对诊断冠心病的敏感性(78，3％)和特异性 (87．1％)较免疫比浊法的敏感性 (63．O％)和特异性 (86．5％)高，x =28，94，P0．001。结论 建立了一种检测血清 CRP的 新方法，对诊断冠心痛有临床应用价值。 关键词 ：c反应蛋 白；液相蛋 白质芯片；冠心痛；诊断 基于Bio-Plex系统的液相蛋白质芯片技术是新 克隆抗体(M86842M、M86284M)及抗原(A97201H) 近发展起来的一种新的检测方法。用荧光染料将聚 购 自BioDesign公司；聚苯 乙烯荧光微珠 (28号)、 苯乙烯微珠分别染成不同的荧光色进行编码，在微 微珠包被试剂盒购 自BioRad公司；抗体的生物索 珠表面以共价键方式连接抗待检测蛋 白的抗体 ，捕 化试剂盒购 自Sigma公司；CRP的免疫 比浊法检测 获样品中相应的抗原，另一生物素化的检测抗体与 试剂盒购 自上海执诚公司。 抗原结合，再以荧光素标记亲合素与生物素化单抗 1，3 CRP单抗 (M86842M)的聚苯 乙烯荧光微珠包 结合进行识别分析。不同微珠可以通过荧光波谱相 被 取 400 l微珠 ，14000×g离心4min，弃上清 ， 互区别，类似于微阵列蛋白质芯片的方法，可以实现 加入 320 l微珠洗涤缓冲液，震荡30S，超声30s， 多种指标同时检测，给临床检测和科研测试提供 了 14000×g离心4rain，弃上清，加入 320 l微珠活 新的途径。本试验 目的为建立一种检测血清 c反 化缓冲液，震荡30s，超声30s，加入40 l1．(3一二 应蛋 白(CRP)的新方法 。 甲氨基丙基)一3一乙基碳二亚胺盐酸盐 (EDC)和 40 1 材料与方法 lN-羟基磺基琥珀酰亚胺(N—hydroxysulfosuccinim． 1，1 对象及分组 2004～2005年在本院住院，有 ide，s—NHS)，1400r／min震荡20min，14000×g离 胸闷、胸痛等症状，疑诊冠心病(CHD)患者356例， 心4min，弃上清，加入 600trlPBS洗涤，震荡 308。 排除肝肾功能不全、感染、肿瘤、免疫系统疾病、凝血 超声30s，14000×g离心4min，弃上清，加入400 功能障碍 以及近期有大手术史、急性心肌梗死急性 lPBS重悬，分装成4管，每管分别加入 5、7、9、12 期、血清肌酸激酶 (CK)升高大于正常值2倍以上 txgCRP单抗，补充 PBS至每管 500 l终体积，4oC 等可能影响CRP的情况后，共有296例符合标准纳 1400r／min震荡过夜；14000×g离心4rain，弃上 入研究，其中男性 191例，女性 105例，年龄 (61±