内质网分子伴侣家族成员在幽门螺杆菌感染胃粘膜中的表达及意义.pdfVIP

中文摘要 幽门螺杆菌(helieobaeterpylori，Hp)是上消化道疾病的主要致病菌，在 人群中的感染率较高，目前已知其与慢性胃炎、消化性溃疡、胃癌、胃粘膜相 关淋巴组织淋巴瘤关系密切。为探讨Hp的致病机理及Hp感染后机体的 shock 病理生理变化，许多学者对有关的热休克蛋白(heat 了大量研究，发现Hp本身含有HSP，可能作为致病因子在Hp感染时发挥 作用；而且Hp感染尚可刺激胃粘膜细胞产生不同的HSP，在Hp相关性胃 疾病中发挥细胞保护作用。 ／生物细胞在受热和其他损害因素如缺血、缺氧、重金属离子、病毒感染、 DNA损伤等作用下发生热休克反应，应激启动一类新的蛋白质合成基因一 热休克蛋白基因，合成热休克蛋白。HSP是一类高度保守的蛋白质，其主要 功能是在应激状态下保护细胞生命活动所必需的蛋白以维持细胞生存。热 休克蛋白通常与具有不同功能的多种蛋白质在细胞中形成复合体并通过复 合体的形成或者解离而参与有关蛋白的折叠、细胞内运输以及蛋白质降解 等过程，以调节靶蛋白的活性和功能，但又不参与靶蛋白的组成，因此又被 认为是一种分子伴侣(molecular chaperon)o regulation disulfideisomer- Grp94(glucose protein)、Grp78、PDI(protein ase，蛋白质二硫键异构酶)是内质网分子伴侣家族重要成员。在新生肽链 合成的早期阶段，Grp94与新生肽链形成稳定的复合物协助其折叠和装配， 它也能与尚未装配或错误折叠的蛋白质形成复合物，同时在肿瘤细胞中具 有抗原提呈作用。Grp78又称Bip(immunoglobulin bindingprotein，免疫球蛋 白结合蛋白)，存在于各类哺乳动物细胞的内质网腔中，在应激状况下，能 与蛋白质结合，维系新合成的蛋白分子的恰当构型，防止在正确的多聚体形 成前，蛋白亚单位不恰当的折叠和聚集；陪伴蛋白分子在细胞内转运、跨膜， 参与蛋白质的折叠、伸展及多聚复合体的组装；可把异常蛋白质运输到内质 网降解系统，使之降解，以免对细胞造成进一步损害；能重新激活某些酶的 作用，以维护细胞的功能和生存。PDI作为酶催化蛋白质分子中二硫键的 形成，作为分子伴侣在蛋白质的翻译及翻译后进行的转运过程中起着重要 作用。 我们研究了幽门螺杆菌感染与未感染胃粘膜上皮细胞内质网超微结构的改 mRNA水平及蛋白水平，探讨 变，并检测了胃粘膜组织中Grp94、Grp78、PDI 它们在Hp感染中的作用。结果如下： 应用透射电镜观察了12例幽门螺杆菌感染胃粘膜标本，5例无幽门螺 杆菌感染胃粘膜标本。以快速尿素酶试验及Giemsa染色确立有无Hp感 染。胃镜检查时于胃窦部取材，2．5％戊二醛固定，经1％锇酸后固定，梯度 乙醇和丙酮脱水，Epon812树脂包埋，切片后电子染色，透射电镜下观察。 无幽门螺杆菌感染胃粘膜上皮细胞微绒毛规整、排列整齐，线粒体及内质网 形态完整。而幽门螺杆菌感染胃粘膜上皮微绒毛大量脱落、排列紊乱，细胞 内出现空泡变性，线粒体破裂，内质网扩张、肿胀明显，有的破裂、核糖体脱 落。提示，幽门螺杆菌感染可破坏胃粘膜上皮细胞，而在胞浆中占重要地位 的内质网的改变也很明显，这可能影响内质网合成蛋白及分子伴侣。 为进一步了解一些内质网分子伴侣在幽门螺杆菌感染中的作用，应用 半定量RT—PCR方法分别检测了感染与未感染幽门螺杆菌的胃粘膜组织 mRNA的表达情况。胃镜下于胃窦部取材2块，TRIzol 中Grp94、Grp78、PDI 琼脂糖电泳后观察条带，并拍照、计算条带密度值。未感染组28例，Grp94、 Grp78、PDI mRNA表达量分别为0．8823±0． 0．0794；感染组32例，Grp94、Grp78、PDI 0817、1．1586