DNA分子标记及其在保护生物学中的应用.pdfVIP

维普资讯 第26卷第 1期 浙江师范大学学报 (自然科学版) V01．26，No．1 2003年 2月 JOURNALOFZHEJIANGNORMALUNIVERSII、Y(Nat．Sci．) Feb．2003 文章编号：1001—5051一(2003)O1—0060—05 DNA分子标记及其在保护生物学中的应用 陈婴芳， 徐宏发 (华东师范大学 生命科学学院，上海 200062) 摘 要：根据国内外最新资料 ，论述了限制性片段长度多态性、随机扩增多态性、扩增片段多态性和微卫星等 DNA分子标记的基本原理及其优缺点；同时，论述了DNA分子标记在保护生物学中检测遗传多样性、遗传 管理及确定分类地位和保护地位 、系统进化、性别鉴定、基因图谱和基因定位等方面的应用． 关键词：DNA分子标记；保护生物学；限制性片段多态性 (RFIP)；随机扩增多态性 (RAPD)；扩增片段长度多 态性 (AFLP)；微卫星(SSR) 中图分类号 ：Q3；Q16 文献标识码：A 1980年 Botstein等[1采用DNA限制性片段 或非同位素标记的某一片段 DNA作为探针，使 多态性(RFLP)作为一种新 的遗传标记，从而开 酶切片段与探针杂交，从而显示与探针含同源顺 创了直接用 DNA的多态性发展遗传标记的新阶 序的酶切片段在长度上的差异，这种差异反映了 段．近2O年来，DNA分子标记得到了迅猛发展， DNA分子水平上的差异，它可能是酶识别序列内 至今已衍生出不下 1O种分子标记、如：限制性片 的点突变或是部分DNA片段的缺失、插入、异位 段长度 多态 性 (RFLPs)、随机 扩增 多 态性 和倒位等．RFIP分析数据多态信息量大，呈共显 (RAPDs)、微卫星 DNA(SSR)、小卫星 DNA、扩 性标记，不受显隐性关系、环境条件、发展阶段及 增片段长度多态性 (AFLP)、特异性扩增长度多 组织部位的影响，结果稳定 ，重复性好．但 RFLP 态性(SAP)和三 内切酶扩增的限制片段长度多态 是一项综合技术，应用过程中涉及基因组 DNA 性 (TE—AFLP)等等．近年来 ，保护生物学家充分 的提取、DNA片段的克隆、Southern印迹转移、 认识到DNA分子标记在濒危动植物遗传管理、 DNA探针的制备和分子杂交等一系列分子生物 分类地位确定、系统进化分析上的重要性．本文论 学技术，技术复杂，周期长，费用较高，而且检测多 述几种应用广泛的DNA分子标记在动植物保护 态性水平过分依赖于限制性内切酶的选用，使得 中的应用． 多态位信息含量低．同时，检测中需要放射性同位 素，使它的广泛应用受到了一定的限制． 1 DNA标记的种类及特点 1．2 随机扩增多态性(RAPDs) 1．1 限制性片段长度多态性 (RFIPs) RAPD技术是 由美 国科学家 wIlliams和 RFLP是发展最早 的DNA分子标记技术． welsh于 1990年分别研究提出的一种以聚合酶 其基本原理是用限制性内切酶切不同个体的基因 链式反应(PCR)为基础的DNA分子标记 。一I．它 组 DNA后，产生大小不同的DNA片段，通过 电 以人工合成的随机寡核苷酸(通常为 9～1O个核 泳和Southern印迹转移到支持膜上，利用同位素 苷酸)片段作引物，以基因DNA 为模板，进行 收文 日期：2002-05-10I修订 日期：2002—09-10 基金项 目：国家 自然科学基金资助 作者简介：陈要芳 (1976一)，女，浙江永康市人