LCM纯化的鼻咽癌间质及正常鼻咽间质的定量蛋白质组学研究.pdfVIP

PIIII! … www．pibb．ac．cn LCM 纯化的鼻咽癌间质和正常鼻咽间质 的定量蛋白质组学研究半 李美香 ，，∞ 肖志强 ” 彭 芳 李国庆 ，’张鹏飞D 李茂玉 李 萃D 李 峰 刘迎福 ， 陈主初 )“ ()·中南大学湘雅医院卫生部肿瘤蛋 白质组学重点实验室，长沙410008；)中南大学湘雅医学院肿瘤研究所，长沙410078； )南华大学医学院组织胚胎学教研室，衡阳421001：4)南华大学生命科学与技术学院，衡阳421001) 摘要 问质在肿瘤发生发展中的作用越来越受到重视．为寻找与鼻咽癌(nasopharyngealcarcinoma，NPC)发生发展相关的特 异性间质蛋白，采用激光捕获显微切割技术(1asercapturemicrodissection，LCM)纯化鼻咽癌间质和正常鼻咽黏膜问质，荧光 差异双 向凝胶 电泳(fluorescenttwo—dimensionaldifferencegelelectrophoresis2-D，DIGE)结合质谱技术分离鉴定间质相关蛋 白．Westernblot及免疫组织化学技术验证了其中3个差异蛋 白(CapG、L—plastin和 S100A9)，证实了2D．DIGE结果的可靠 性．建立了LCM纯化的鼻咽癌间质和正常鼻咽间质的荧光差异蛋 白表达图谱，高通量筛选与肿瘤发生相关的间质蛋 白，共 得到34个有统计学意义的蛋白质点，质谱鉴定得到2O个差异蛋白．研究结果提示：这些差异表达的蛋白质将有助于阐明鼻 咽癌细胞和周围间质的关系．对问质蛋 白功能的进一步研究，将有助于解析问质在肿瘤发生中的作用机制，并为从间质途径 寻找肿瘤治疗靶标提供新思路． 关键词 鼻咽癌，问质，激光捕获显微切割，荧光差异双向凝胶电泳，质谱，Westernblot，免疫组织化学 学科分类号 R766．3，R363．2，Q51 DOI：10．3724S／P．J．1206．2009．00059 近年来研究认识到，间质在肿瘤的发生、发展 好发于我国南方各省及东南亚地区的常见恶性肿 过程中起着重要作用，肿瘤的发生发展并非由上皮 瘤，早期转移是鼻咽癌 的显著特征之一和患者死亡 或间质单方面决定，而是由两者相互作用所构成的 的主要原因6[,71．肿瘤的生长、侵袭和转移，在细胞 肿瘤 一宿主微环境的平衡状态所决定[1121．在肿瘤 内均有相应的蛋 白质作为执行者．蛋白质组学的出 中，间质细胞成分、细胞外基质与肿瘤细胞相互作 现及其技术的发展为生命科学研究、人类疾病的防 用，构成了肿瘤微环境[11，是肿瘤细胞生长、转 治带来 了新的革命 ．荧光差异双 向凝胶 电泳技术 移、逃逸免疫监视的基础 ．这些特异性间质细胞包 (tWO-dimensional fluorescence difference gel 括血管内皮细胞及其周 围的支持细胞、炎症细胞 electrophoresis，2．DDIGE)是新的蛋 白质组学技 (中性粒细胞、巨噬细胞、嗜酸性粒细胞和肥大细 术，该技术可以明显提高双向凝胶电泳的重复性和 胞)、免疫细胞(淋 巴细胞和肥大细胞)、成纤维细胞 敏感性，为在蛋白质整体水平探讨鼻咽癌间质在鼻 和平滑肌细胞[41．异常的问质 内环境，直接或间接 调节间质蛋 白、细胞表面分子 、黏附蛋 白的功能， 或释放生长因子，产生细胞外基质形成肿瘤生长所 国家重点基础研究发展规划(973)(2001cb510207)，教育部跨世纪 必需的微环境，最终可能促进附近的上皮细胞的增 优秀人才培养计划基金(教计1~1[2002148)，湖南省科技厅重大科技专 项(06SK2004)，国家自然科学基金30800419)和教育部新 生和恶性转化f51，从而促进肿瘤 的发生发展 ．因