Vero细胞流感病毒在WAVE生物反应器.PDF

GE Healthcare Life Sciences 应用指南28-9992-69 AA 疫苗 Vero细胞流感病毒在WAV E生物反应器 中的Cytodex微载体无血清培养工艺 本工艺研究的目的是建立一个无动物源性成分的病毒培养 工艺，用于Vero细胞流感病毒的生产。最终的工艺快速简 单，易于放大和工业化生产。本研究评估了下列关键参 数：培养基组成、细胞消化、培养基添加剂、搅拌和病毒 感染参数。不同的培养基和蛋白酶对细胞的影响采用静态 培养方式进行评估。作为优化WAV E生物反应器中细胞生 长条件的一部分，评估了多种添加剂和不同摇动条件的影 响。接下来，对胰酶浓度和病毒储液稀释度进行比较， 以找到最佳病毒感染参数。最后，验证了使用微载体和 WAV E生物反应器用于Vero细胞中病毒培养整个工艺的稳 图1.具有WAV EPODII*反馈控制器和一次性Cellbag生物反应器的 定性和可重复性。数据显示，已经建立了一个稳定可靠的 WAV E生物反应器。 工艺，使用WAV E生物反应器在无动物源性成分培养条件 下使用Cytodex 1微载体贴壁的Vero细胞生产流感病毒。 使用一次性Ce llbag* 生物反应器的WAV E生物反应器 （图 流感大流行的威胁，对快速生产大量流感疫苗的需求也随 1 ）易于安装，无需清洗和验证，操作灵活成本低，快速 之上升。流感疫苗在鸡胚中的生产依赖于鸡胚的有限供 方便的取代传统不锈钢搅拌反应器。 应。疫苗生产从鸡胚向细胞培养方法和一次性产品的转换 提供了生产灵活性，将显著减少疫苗临床试验和报批的时 间，从而有效缩短上市周期。因此，新型的基于细胞培养 介绍 的疫苗生产工艺是确保更快速反应的一种有效方法，成为 技术发展的趋势。 流感病毒疫苗的培养工艺多数仍采用传统鸡胚培养方式。 这种方法劳动强度大，而且需要较大的生产厂房和空间， 多个细胞株已经广泛用于病毒类疫苗的生产。本研究使用 不易于规模化生产放大和自动控制。 的Vero细胞，目前已经成为用于多种人用疫苗生产的公认 平台。因为在人疫苗生产中必须避免动物来源的成分，本 研究中经过优化的病毒培养工艺是完全无动物源性成分 的。 材料与方法 贴附到Cytodex 1微载体的最佳条件。在工作体积为2 L的 Cellbag- 10 L中进行细胞培养。所有的培养都接种4 ×10⁵ 细胞株、维持和扩增 细胞/ mL 。参考文献3中介绍的摇动参数略作修改如下所 源自非洲绿猴肾细胞的Vero细胞购自ATCC （Nr. CCL81）。 示： 细胞在含有三种不同添加剂的无动物源性无血清培养基中 •间歇摇动6 小时 （1 6 r p m/ 4 . 5 °摇动2分钟，然后0 进行培养：Pluronic** F-68 (Sigma-A ldrich) 、大豆蛋白胨 rpm/0 °静止18分钟）。为了促进细胞铺展，培养物在 (Fluka)和大豆来源的胰酶抑制剂(Sigma-Aldrich; 1 mg/mL溶