酸性成纤维细胞生长因子对庆大霉素及顺铂所致肾小管上皮细胞损伤的拮抗效应.pdf

酸性成纤维细胞生长因子对庆大霉素和顺铂所致肾小 管上皮细胞损伤的拮抗效应1 1 2 1 2 2 3 3 刘华钢 ，黄巨恩 ，刘丽敏 ，王慧杰 ，胡文娟 ，李校堃 ，肖健 1 广西医科大学药学院，南宁 （530021 ） 2 广西医科大学组织学与胚胎学教研室，南宁 （530021 ） 3 温州医学院生物与天然药物研究院，浙江温州 （325027 ） E-mail ：hgliu@263.net 摘 要：目的研究酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)对庆大霉素（GM ）和顺铂(DDP) 引起的 体外培养的肾小管上皮细胞损害的保护作用。方法：大鼠肾皮质经研磨、过网、胰蛋白酶消 化，进行肾小管上皮细胞的体外培养。经Cytokeratin 18 抗体进行鉴定后，用GM、DDP 建 立损伤模型，观察aFGF 对损伤的肾小管上皮细胞的保护作用。结果：①经形态学观察、GM 或DDP 组与对照组比较，CAT、SOD、GSH-Px 、Na ＋－K ＋－ATP 酶活性下降，而NAG 活性 和NO 、MDA 升高（(P0.01 或P0.05) ，提示肾小管上皮细胞的培养和GM、DDP 损伤的建 模成功。②aFGF+GM 或DDP 组与GM 组比较，大多数生化和酶学指标有显著或非常显著性 差异(P0.05 或 P0.01)；而aFGF+GM 或 DDP 组与对照组比较，CAT、NAG 、GSH-Px 、 Na ＋－K ＋－ATP 酶活性无显著性差异，但 SOD 活性下降、NO 、MDA 升高尚有显著性差异 (P0.05)。结论 aFGF 对GM 、DDP 损伤的肾小管上皮细胞有明显的保护作用。 关键词：酸性成纤维细胞生长因子，顺铂，肾小管上皮细胞，细胞培养 中图分类号：R-332 R322.61 以庆大霉素(Gentamicin,GM)为代表的氨基糖甙类抗生素主要作用于革兰氏阴性细菌，因 其抗菌谱广、疗效价且费用低廉而广泛应用于临床，但由于血清有效浓度与毒性浓度相近， 毒性作用的发生率高；而顺式二氯二氨铂或简称顺铂(Cisplatin,DDP或CDDP)是一种广谱、有 效的抗癌药物，其疗效与用药剂量成正比。尽管GM 和DDP在分子结构、作用机理和临床适 应症等方面都存在很大的差异，但在副作用方面却很相似，即过量使用都会引起严重的肾毒 性和耳毒性，这也是它们临床应用受限的主要原因[1-2] 。本研究用原代培养的大鼠肾小管上皮 细胞制作GM、DDP 肾损伤模型，观察aFGF 的作用，并探讨其可能的机制，为临床应用提供 依据。 1. 材料与方法 1.1 实验动物和试剂 实验使用SD大鼠40只，体重约50g，由广西医科大学实验动物中心提供。新生小牛血清由杭 州四季青公司提供；DMEM培养基由Gibco公司提供；胰蛋白酶由Sigma公司提供；抗细胞角 质素(Cytokeratin 18)抗体、SABC、DAB试剂盒由武汉博士德公司提供；硫酸庆大霉素由广西 南宁市百合药业集团有限公司产品（批号0504004 ）；DDP为江苏豪森药业股份有限公司产品 （批号051003 ）；基因重组人酸性成纤维细胞生长因子(rh-aFGF) 由暨南大学生物工程研究所 提供（批）；丙二醛(MDA)测定试剂盒、过氧化氢酶测定试剂盒、超氧化物歧化 1本课题得到国家重点基础发展规划项目（973项目）（G199954204 ）的资助。 - 1 - 酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH - Px)试剂盒、N- 乙酰氨基-β-D葡萄糖苷酶(NAG)测定试 剂盒、ATP酶测定试剂盒为南京建成生物工程研究所产品。 1. 2 实验方法和步骤 1.2.1 肾小管节段的分离、消化 断头处死大鼠，无菌条件下取肾，将肾皮质分离后洗净剪 碎, 用PBS平衡盐溶液清洗