4-2.2生物选修1课堂教学课件-微生物的分离与计数31.ppt

尿素[CO(NH2)2]——重要的农业氮肥。 只能被土壤中细菌分解为NH3才能被植物吸收利用 CO(NH2)2 + H2O CO2 +2NH3 筛选菌株 提出的问题 —如何寻找耐高温的酶？ 解决问题的思路 —寻找耐高温环境； 原理 —高温淘汰其他菌，选出耐高温细菌， 耐高温菌种提取耐高温酶。 筛选菌株选择培养基：允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。 统计菌落数目： 1、活体计数法（稀释涂布平板） （1）操作方法： 稀释涂布平板→统计菌落数 （2）原理： 1个菌落→1个活菌 （3）统计原则 ①选 30～300 个菌落的平板统计 ②每个稀释度取3个平板取其平均值 （二）样品稀释 （1）测细菌数：一般用104、105、106稀释液 （2）测放线菌：一般用103、104、105稀释液 （3）测真菌数：一般用102、103、104稀释液 原则：确保平板上的菌落数在30～300之间。 （三）微生物的培养与观察 1、接种：用适当的稀释液作涂布平板 2、培养：细菌：30～37℃，1～2d; 放线菌:25～28℃, 5～7d; 霉菌: 25～28℃, 3～4d. 3、观察：a.每24h统计一次菌落数目 b.以“稳定菌落”为观察对象 　　 将土样加入装有30ml选择培养基的锥形瓶中，将锥形瓶固定在摇床上，在一定温度下振荡培养1-2d，直至培养液变混浊。 吸取一定量的培养液，转移至另一瓶新鲜的选择培养基中，以同样的方法培养到培养液变混浊。 微生物培养的基本程序 （四）鉴定 鉴别培养基：不影响微生物的生存 酚红培养基： 鉴定分解尿素的细菌 原理：脲酶催化尿素分解成氨→培养基碱性增强→ 酚红变红→脲酶阳性 复习 纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至少包括三种组分，即C1酶、 CX酶和葡萄糖苷酶，前两种酶使纤维素分解成纤维二糖，第三种酶将纤维二糖分解成葡萄糖。 纤维素 纤维二糖 葡萄糖 C1酶 Cx酶 葡萄糖苷酶 背景知识 滤纸崩溃法 纤维素酶活性的测定实验： 背景知识 刚果红可以与纤维素形成红色复合物，当纤维素被纤维素酶分解后，红色复合物无法形成，出现以纤维素分解菌为中心的透明圈，我们可以通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。 背景知识 实验流程示意图 一、实验目的 二、实验原理 三、所需仪器、材料、用具和药品 四、实验的方法和步骤 五、分析结果 实验设计 一、实验目的 1、利用特定的选择培养基和鉴别培养基从土壤中分离分解纤维素的微生物。 2、掌握刚果红染色的机理和操作。 实验设计 1、以纤维素为碳源的选择培养基能选择出分解纤维素的微生物。 2、刚果红可以与像纤维素这样的多糖物质形成红色复合物，而不与水解后的纤维二糖和葡萄糖发生这种反应。 二、实验原理 实验设计 三、所需仪器、材料、用具和药品 1、实验仪器与用具 除了分离分解尿素的细菌中用到的有关仪器用具外，还需要恒温振荡培养箱。 2、材料与药品 实验设计 四、实验的方法和步骤 1、配制培养基 2、灭菌 3、土壤取样 5、样品稀释 6、涂布接种 4、选择培养 7、筛选菌落 实验设计 配制培养基 实验设计 灭菌 酵母膏：实际上是膏状的酵母抽提物，酵母抽提物是国家行业标准的规定名称。酵母抽提物以酵母为原料，采用自溶法或加酶水解法工艺，经分离、脱色而成的，含氨基酸、肽、多肽及酵母细胞水溶性成分的产品。 水解酪素：微生物培养基的氨基酸氮源，由酪蛋白水解得到，常见商品名称为水解酪素或酶解酪素。酪蛋白水解后富含21种氨基酸，氨基酸种类齐全。因此常用于制备培养基。 CMC-Na：羧甲基纤维素钠，是天然纤维素经化学改性后得到的纤维素衍生物，是纤维素的羧甲基醚化物。 实验设计 思考： 1.为什么要在富含纤维素的环境中寻找纤维素分解菌？ 2.将滤纸埋在土壤中有什么作用？你认为滤纸应该埋进土壤多深？ 土壤取样 将滤纸埋在土壤中能使纤维素分解菌相对聚集，实际上是人工设置纤维素分解菌生存的适宜环境。一般将纸埋于深约10cm左右腐殖土壤中。 实验设计 “浓缩”作用 （富集培养） 选择培养 根据样品中目的菌株数量来确定是否需要。 实验设计 样品稀释 实验设计 涂布接种 鉴别纤维素分解菌的培养基 挑选产生透明圈的菌落。挑取产生明显的透明圈的菌落，一般即为分解纤维素的菌落。 接种到纤维素分解菌的选择培养基上，在300C－370C培养，可