抗炭疽毒素保护性抗原单克隆抗体的制备及功能分析_吕洪臻.pdfVIP

第 卷第 期 南京医科大学学报（ 自然科学版） 33 11 年 月 （ ） 2013 11 ACTA UNIVERSITATIS MEDICINALIS NANJING Natural Science · · 1497 抗炭疽毒素保护性抗原单克隆抗体的制备及功能分析 ， 吕洪臻 1 ，唐 小军 1 ，熊四平 1 ，徐 鑫 1 ，郑 峰 2 ，冯振卿 1 *，朱 进 1 2 * 1 2 （ 南京医科大学病理学系，江苏南京 210029 ； 南京军区军事医学研究所，江苏 南京 210002 ） ［摘 要］ 目的：原核表达炭疽杆菌保护性抗原PA10 蛋白，制备单克隆抗体，并进行功能分析。 方法：人工合成炭疽杆菌保护 性抗原PA10 编码基因并克隆入pUC57 载体，酶切鉴定后，将PA10 编码基因插入原核表达载体pCold Ⅱ中，测序验证正确后转 化至大肠杆菌 BL21 （DE3 ），在 IPTG 和低温条件下诱导蛋白表达，SDS验证产物；用 HiTrap IMAC HP 柱纯化重组蛋白， Western blot 进一步验证。 以纯化获得PA10 重组蛋白为抗原，常规程序免疫BALB ／ c 小鼠，制备单克隆抗体，并检测所制备抗体 的中和活性。 结果：获得的 重组蛋白免疫小鼠制备单克隆抗体，最终获得了 株特异性的单克隆抗体（分别命名为 、 PA10 4 2G8 、 、 ）。经体外炭疽毒素保护试验证实，其中 株单抗（ ）具有较强的中和活性，其保护率可高达 。结论：本文成 5A8 7B3 9C9 1 7B3 96％ 功构建并表达炭疽杆菌保护性抗原 ， 制备了具有中和活性的抗 单克隆抗体， 为构建人源化的抗 中和抗体奠定基 PA10 PA PA 础，从而有望用于炭疽病的治疗。 ［关键词］ 炭疽杆菌；保护性抗原；单克隆抗体；中和抗体 ［中图分类号］ ［文献标志码］ ［文章编号］ （ ） R378．72